T4 RNA连接酶

用途：用RNA 3'末端标记；RNA和RNA分子间连接；寡核苷酸的环化；tRNA修饰；5' RACE中寡核苷酸连接到cDNA单链；在蛋白质特***点引入非天然氨基酸。

来源：由大肠杆1菌表达，表达***的来源为T4嗜菌体。

活性定义：37℃30分钟内，催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成为磷酸酶不能消化的环形产物所需的酶量定义为1个活性单位。

活性检测条件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。

低碱性磷酸酶血症的症状存在异质性，其临床症状多样，需要及时进行cure

典型症状

1、单纯牙型乳牙会出现早期脱落的情况，仅仅表现出牙齿受累的症状表现。

2、围生期型患者会出现四肢短小的症状，主要因为严重骨骼矿化不足，然后造成骨骼系统异常的症状表现。

3、良性新生儿型患者会出现骨骼畸形的情况，比如漏斗胸，以及身材矮小的症状，但是这种类型的症状，在出生以后可以达到改善。

4、***型患者会出现牙齿早脱的症状，通过X-ray检查，可以显示未成熟牙齿早失的症状，如果出现佝偻病的情况，患者会出现胸廓畸形、头颅畸形的症状，患者的囟门会变得宽大，但是常常会出现颅缝早闭的情况。

DNA copy主要的特点是半保留copy、半不连续copy。在copy过程中，原来双螺旋的两条链并没有被***，它们分成单独的链，每一条旧链作为模板再合成一条新链，这样在新合成的两个DNA分子中，一条链是旧的而另外一条链是新的，因此这种copy方式被称为半保留copy。

DNA的两条链是反向平行的，一条是 5'→3'方向，另一条是 3'→5'方向。在copy起点处，两条链解开形成copy泡(replication bubble ), DNA向两侧copy形成两个copy叉(replication fork)。随着DNA的不断解旋，两条链变成单链形式，可以作为模板合成新的互补链。但是，生物细胞内所有的DNA聚合酶都只 能催化 5'→3'延伸。因此，以3 '→5'的链为模板链时，DNA聚合酶可以沿 5'→3'的方向合成互补的新链，这条链称为前导链(leading strand )。当以另一条链为模板时则不能连续合成新链，这条链称为滞后链(lagging strand )。这时，DNA聚合酶从copy叉的位置开始向远离copy叉的方向合成1?2 kb的新链片段，待copy叉向前移动相应的距离后，又重复这一过程，合成另一个类似大小的新链片段，这些片段被称为冈崎片段(Okazaki fragment)。***后，由另一种DNA聚合酶和DNA连接酶负责把这些冈崎片段之间的RNA引物除去，并把缺口补平，使冈崎片段连成完整的DNA链。这种前导链的连续copy和滞后链的不连续copy在生物细胞中是普遍存在的，称为DNA的半不连续copy。

遗传控制中大的困难并不是DNA的，而是需要被的特异DNA段的分离 。如果以***为目的，特异DNA段的分离将大大有助于获得与遗传信息同样多的相关的***产物，一般说这些***产物均为蛋白质多肽，因此抗该蛋白质的对于测定和沉淀蛋白质及其前体有重要用途，甚至可用于了解蛋白质分子量  。AMV反转录酶和MLV反转录酶都必须有引物来起始DNA的合成。cDNA合成的引物是与真核细胞mRNA分子3’端poly（A）结合的12～18个核苷酸长的oligo（dT）。