甘油三酯(TG)检测***盒(比色法),#KTB2200:用异丙1醇抽提取TG,KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸,Periodic acid氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与Acetylacetone缩合生成***物质,在420 nm有特征吸收峰,其颜色的深浅与TG含量成正比。该***盒提供了一种简单的检测方法检测动物***、细胞、serum(浆)以及植物样本中甘油三酯(TG)的含量水平;而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。
游离胆固醇(FC)检测***盒(比色法),#KTB2210:胆固醇氧化酶催化游离胆固醇(FC)生成△4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500 nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。该***盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本如动物***、细胞(***)、serum(浆)中游离胆固醇(FC)的含量水平;而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。
水中微生物DNA提取***盒,样本制备步骤。
步骤1. 样本过滤
1.1 从***盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。
1.2 将滤膜放置在滤器中,并过滤必要体积的水样。
步骤2. 菌体裂解
* 提前准备:预先将恒温仪设置到70℃,将恒温箱设置到37℃。
2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到***盒提供的IncubationDish(平皿)中。
2.2 吸取2mllysis buffer(裂解液),并加到滤膜上。
2.3 将滤膜浸泡在裂解液中,小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。
2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜,并摇晃平皿10秒钟。
2.5 将平皿中的400μl裂解液转移至IncubationTube(孵育管),70°C孵育10分钟。
2.6 样本短暂离心,并加入400μl Binding Buffer(结合液),立即涡旋充分混匀,以防止DNA沉淀。请勿离心样本,并立即进行下一步。
步骤3. DNA提取
3.1 将步骤2.6中的混合液(~800μl)转移到CollectionTube(收集管)内的SpinColumn(离心柱)中,小心液体不要沾到离心柱的边缘。
3.2 离心柱离心≥10000× g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。
3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。
3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。
3.5 ***大速度离心3分钟,以去除残留的洗液2。
3.6 弃掉收集管。
3.7 吸取60μl已70℃预热的洗脱液,直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。
3.8 室温静置2分钟,然后离心8000×g,2分钟,以洗脱DNA。
3.9 样本保存管中的洗脱液即包含DNA,可直接用于PCR,或储存在2~8℃,可存放1周。长期储存是在≤-18℃。
从动物***中提取***组DNA
使用研钵进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物***或人***移入冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。注)下列***请加液氮研磨至粉末状。
A.富含DNA酶的胰脏、脾1脏、胸腺、淋巴等***。
B.富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等***。
C.富含角质蛋白的***或坚硬的***(如骨骼)等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,温和研磨30秒钟。注)使用上述①-注)的实验材料时,请在加入Solution A及RNase A1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③ 收集650 μl研磨好的***匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl,65℃保温5分钟。
使用研磨棒进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物***或人***移入冰浴预冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊状。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。
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