腺病毒相关载体信息推荐「友名生物」
作者:友名生物2021/12/27 8:43:35







PEG法

  其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。

  1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变***(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此***插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤***,在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源***导入到了HE89的原生质体中,建立了植株再生的转化体系。

  PEG法虽然转化效率较高,但必须以裸1露的原生质体为受体,而且还受到***型的限制。





腺病毒是无包膜的线性双链DNA病毒,在自然界分布广泛,至少存在100种以上的血1清型。其***组长约36kb,两端各有一个反向末端重复区(ITR),ITR内侧为病毒包装信号。***组上分布着4个早期转录元(E1、E2、E3、E4)承担调节功能,以及一个晚期转录元负责结构蛋白的编码。早期***E2产物是晚期***表达的反式因子和copy必须因子,早期***E1A、E1B产物还为E2等早期***表达所必须。因此,E1区的缺失可造成病毒在copy阶段的流1产。E3为copy非必须区,其缺失则可以大大地扩大插入容量。腺病毒载体大多以5型(Ad5)、2型(Ad2)为基础,新增了55型(Ad55),很多研究机构在研究当中,55型将比5型流行以及应用更具广泛性。



腺病毒表达

   腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中有效瞬时表达的***递送平台。对于难转染的细胞,如原代或非分裂细胞,采用病毒递送外源***的方式是非常有效的选择。钟鼎生物采用293A腺病毒包装细胞系(含有腺病毒包装所必需的E1***序列,是专为生产腺病毒和进行滴度测定而建立的),用于高滴度的copy缺陷型(E1和E3缺失)腺病毒的生产,以进行外源***的表达。腺病毒感1染几乎所有的细胞类型,除了一些抗腺病毒感1染的淋巴1瘤细胞。腺病毒是研究原代非增殖细胞***表达的***佳系统,它可以使转化细胞和原代细胞中得到的结果直接进行对比;不整合到染色体中,无插入致突变性。能有效进行增殖,滴度高:腺病毒系统可产生108 pfu/ml原液,浓缩后可达1010-1011 VP/ml,这一特点使它非常适用于***cure。



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