PEG法
其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。
1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变***(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此***插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤***,在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源***导入到了HE89的原生质体中,建立了植株再生的转化体系。
PEG法虽然转化效率较高,但必须以裸1露的原生质体为受体,而且还受到***型的限制。
腺病毒表达
腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中有效瞬时表达的***递送平台。对于难转染的细胞,如原代或非分裂细胞,采用病毒递送外源***的方式是非常有效的选择。钟鼎生物采用293A腺病毒包装细胞系(含有腺病毒包装所必需的E1***序列,是专为生产腺病毒和进行滴度测定而建立的),用于高滴度的copy缺陷型(E1和E3缺失)腺病毒的生产,以进行外源***的表达。腺病毒感1染几乎所有的细胞类型,除了一些抗腺病毒感1染的淋巴1瘤细胞。腺病毒是研究原代非增殖细胞***表达的***佳系统,它可以使转化细胞和原代细胞中得到的结果直接进行对比;不整合到染色体中,无插入致突变性。能有效进行增殖,滴度高:腺病毒系统可产生108 pfu/ml原液,浓缩后可达1010-1011 VP/ml,这一特点使它非常适用于***cure。
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