在选用支原体PCR法检测来替代药典方法时，需要考虑如下两个方面：

首先一步是要使用符合欧洲药典要求，经过全方面验证的支原体检测***盒，第二部是自我验证，即确认所用的样本基质对于该***盒方法是合适的，并且操作过程是正确的。小规模的室内验证通常需要采用三个不同批次的***盒，然后加入10CFU的标准品，做复孔（通常是8个复孔），并且至少选择3个支原体物种进行验证。

有的支原体标准品厂家会提供CFU与***拷贝数的比值，以方便二者的换算。因为10CFU只能确定PCR能够达到的检测限在10CFU以下，但无法具体确定灵敏度的数值。带DNA拷贝数标定的***组DNA标准品则可进一步确定检测限的数值。

总之，PCR方法很有用，但需要避免假阴性，验证时应使用阳性对照、阴性对照、无模板对照和内控对照，以保证PCR反应正常，以及支原体少量存在时确实能检出来，支原体不存在时也确保是结果阴性，从而使得PCR方法在工业应用时能确保***终结果的可靠。

酵母***组DNA提取好方法

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫CN酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。

提取***组DNA和细胞核DNA是不同的方法

提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行

SDS十二***磺酸钠：可***细胞膜、核膜,并使***蛋白与DNA分离

CATB是一种抽提液,***细胞膜的~

DNA不溶于异丙1醇,异丙1醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了

棉花等酚类、多糖类物质较多的植物ＤＮＡ提取法：

1 取2ｇ新鲜幼嫩的叶片放入研钵中,加入液氮后快速、充分研磨,待成极细的粉末状时迅速转入到50ｍｌ离心管中。

2 在50ｍｌ离心管中加入10ｍｌ冰预冷的提取缓冲液,在涡悬振荡器上充分混匀。

3 于4℃,2700×ｇ离心20分钟,倒去上清液。

4 在沉淀中加入5ｍｌ裂解缓冲液,在涡旋振荡器上充分混匀。

5 于65℃水浴锅中温育30ｍｉｎ。

6 加入5ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24/1),并上下翻转以充分混合。

7 于4℃,2700×ｇ离心5分钟。

8 转移上层水相至一新的50ｍｌ离心管中。

9 重复步骤7-9一次。

10 加入2/3体积的冰预冷的异丙1醇,并上下翻转以充分混合,至-20℃2ｈ。

11 于4℃,1200×ｇ离心10ｍｉｎ。

12 在一新管中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液,用玻棒将ＤＮＡ转入该管(如不能直接用玻棒缠出,可离心后倒出上清,再在其中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液),放置20ｍｉｎ后稍许离心,移走上清并吸出残存乙醇,室温干燥。

13 加入1 0ｍｌＴＥ(10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌＰＨ=8 0,1ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ)并加入终浓度为20(ｇ/Ｌ的ＲＮａｓｅＡ,过夜。

14 风干,用50μｌＴＥ缓冲液溶解,存于-20℃备用。