随着***组测序、分子生物学检测手段的快速发展,PCR和荧光定量PCR实验,正在越来越多的实验室应用。然而,PCR作为一种高灵敏度的检测手段,PCR的实验结果也容易被各种无关的外源性DNA或RNA所干扰。
PCR实验室中,很容易发生DNA的交叉污染,污染通常来自于离心管、移液器和其他试验设备产生的DNA气溶胶,或DNA溶液污染桌面,或吸样枪不慎将样品或模板核酸吸入枪内。据估算,一个气溶胶颗粒可含48000个DNA拷贝。 因此,为保证PCR试验的数据准确,避免交叉污染,应定期对PCR实验室做DNA污染情况的监测。
核糖核酸(缩写为RNA,即Ribonucleic Acid),存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种,即A(腺piao呤)、G(鸟piao呤)、C(胞***H4N2)、U(尿***H4N2),其中,U(尿***H4N2)取代了DNA中的T。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。
***一个细胞含RNA约10pg(含DNA约7pg)。与DNA相比,RNA种类繁多,分子量较小,含量变化大。RNA可根据结构和功能的不同分为信使RNA和非编码RNA。非编码RNA分为非编码大RNA和非编码小RNA。非编码大RNA包括核糖体RNA、长链非编码RNA。非编码小RNA包括转移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA(20~300nt)包括 miRNA、 SiRNA、 piRNA、scRNA、 snRNA、 snoRNA等,***也有小分子RNA(50~500nt)。
tRNA二级结构
约50%碱基配对,形成四段双螺旋,与五段非配对序列形成三叶草形结构。
该结构中存在四臂四环:
①氨基酸臂。
②二氢尿***H4N2臂(DHU臂、D臂)和二氢尿***H4N2环(DHU环、D环),特征是含二氢尿***H4N2(DHU、D)。
③反密码子臂和反密码子环,特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接,3′端与piao呤核苷酸连接。TΨC臂(T臂)和TΨC环(Ψ环),特征是TΨC环含胸腺***H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。
④额外环3~21nt。
tRNA三级结构呈L形,氨基酸结合位点位于其一端,反密码子环位于其另一端,DHU环和TΨC环虽然在二级结构中位于两侧,但在三级结构中却相邻。尽管各种tRNA的长度和序列不尽相同,但其三级结构相似,提示三级结构与其功能密切相关。
新冠核酸检测是对病例确诊的标准之一,是病例早发现、早诊断、早隔离、早cure的关键,也是对传1染源隔离cure和密切接触者***观察的基础。
新冠感1染***后,首先会在呼吸道系统中进行繁殖, 因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断***是否感1染病毒。在感1染一段时间以后(一般是7-10天),***会产生针对病毒的特异性抗1体,所以用免1疫学检测方法能够检测这些特异性抗1体,判断***是否感1染过病毒。这就是病毒的核酸检测与抗1体检测。与抗1体检测相比,核酸检测更加灵敏,也是实验室检测的“金标准”。
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