巢式PCR(NEST PCR枝术.

先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量.然后再用一对内引物扩增以得到特异的PCR带。此为巢式PCR。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式PCR。为减少 巢式PCR的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些，且用量较少。同时在第yi次PCR时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度。这样在第yi次PCR时，由于较高退火温度下内引物不能与模板结合,故只有外引物扩增产物，经过若干次循环。待外引物基本消耗尽，无需取出第yi次PCR产物，只需降低退火即可直接进行PCR扩增。这不仅减少操作步骤。同时也降低了交叉污染的机会。这种PCR称中途进退式PCR( drop-in, drop-out PCR)上述三种方法主要用于少量DNA模板的扩增。

分子克1隆

PCR被广泛应用于目标DNA部分片段的克1隆，该技术被称为 PCR 克1隆。在直接PCR克1隆中，DNA（如，gDNA、cDNA、质粒DNA）的目标区域被扩增并插入到特殊设计的兼容载体中。

除了制备插入片段，PCR也是一种在在克1隆后筛选克1隆是否携带目标插入片段的有效方法。引物经过设计，可以用于确定载体中插入片段是否存在和插入方向。

目前的病毒核酸检测***盒，多数采用荧光定量PCR方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么，核酸检测到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。

取样

采集***的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处

留样

将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖

保存

将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检

核酸提取

将样本送进实验室进行核酸提取

上机检测

将提取物进行荧光PCR扩增反应