DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的copy和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺piao呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD* 的DNA 连接酶。
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链3‘-OH末端和,另一DNA链的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。
DNA连接酶的性质
噬菌体T4DNA连接酶分子也是一条多肽链,分子量为60Ku,其活性很容易被0.2mol/L的KCl和精胺所***。此酶的催化过程需要ATP辅助。T4DNA连接酶可连接DNA-DNA,DNA-RNA,RNA-RNA和双链DNA粘性末端或平头末端。另外,NH4C1可以提高在大肠杆1菌DNA连接酶的的催化速率,而对T4DNA连接酶则无效。无论是T4DNA连接酶,还是大肠杆1菌DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。
T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之间的连接,连接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接,也可以进行RNA分子(***短8个碱基)的环化连接。
T4 RNA Ligase可以用于RNA和单核苷酸之间的连接,单核苷酸必须为5'和3'均磷酸化的形式,此时常用于RNA的3'末端标记。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5'磷酸基团,RNA提供3'羟基时,连接效率较高;当DNA提供3'羟基,RNA提供5'磷酸基团时,连接效率非常低。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之间的连接,但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接,例如5' RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行,但比较困难。
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