遗传控制中大的困难并不是DNA的，而是需要被的特异DNA段的分离 。如果以***为目的，特异DNA段的分离将大大有助于获得与遗传信息同样多的相关的***产物，一般说这些***产物均为蛋白质多肽，因此抗该蛋白质的对于测定和沉淀蛋白质及其前体有重要用途，甚至可用于了解蛋白质分子量  。AMV反转录酶和MLV反转录酶都必须有引物来起始DNA的合成。cDNA合成的引物是与真核细胞mRNA分子3’端poly（A）结合的12～18个核苷酸长的oligo（dT）。







置换合成法。该方法利用链在反转录酶作用下产生的DNA RNA杂交链不用碱变性，而是在dNTP存在下。利用RNA酶H在杂交链的mRNA链上造成切口和缺口。从而产生一系列RNA引物，使之成为合成第二链的引物。在大肠DNA聚合酶工的作用下合成第二链。该反应有3个主要优点：①非常有效；②直接利用链反应产物，无须进一步处理和纯化；③不必使用S1核酸酶来切割双链cDNA中的单链发夹环。




以Riboclone M-MLV CDNA合成技术为例。Riboclone M—MLV cDNA合成系统采用M—MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶，使合成的cDNA更长。该系统的链合成使用M-MLV反转录酶，cDNA第二链合成采用置换合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶I进行置换合成，用T4 DNA聚合酶切去单链末端，方法简便易行。