营养条件

1．培养基细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质，包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、***等。针对不同细胞的营养需求，有多种合成培养基可供选择，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各种合成培养基提供基础营养物质之外，还需根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是细胞外基质、生长因子和转铁蛋白等重要物质，常用的是胎牛血1清。要根据不同的细胞和不同的研究目的决定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能维持细胞较快的生长增殖速度，称为生长培养液；为维持细胞缓慢生长或不死，添加2%～5%的血1清即可，称为维持培养液。但血1清中也存在***于细胞生长和繁殖的物质，如补体、免1疫球蛋白和一些生长***因子；成分不明确，影响对结果的分析；不同动物、不同批次的血1清活性差别较大，影响培养效果的稳定性。

谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源，在细胞生长代谢过程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

自2008年开始，小鼠和人的ips细胞研究取得了极大的发展，并在体细胞的选择、转录因子的组合和数量、病毒载体、筛选条件和小分子化合物等方面进行了完善，还逐步向***的cure方面深入，镰刀形红细胞贫1血症cure的研究，从理论和实践上为人类单***遗传病的cure奠定基础。此外，猴、大鼠和猪ips细胞的建立在人类***研究上具有重大应用价值,既可构建人类***的动物模型,又能进行细胞移植实验，为将来的实验细胞替代cure奠定基础。

利用细胞培养技术研究细胞的生命活动规律，可以很方便地采用各种实验技术和方法来观察、检测和记录。例如：通过倒置相差显微镜等直接观察活的细胞；应用缩时电影技术、摄像或者通过闭路电视长时间连续记录和观察被培养细胞的体外生长情况，可以直观揭示培养细胞的生命活动规律以及所施加因素的反应；利用同位素标记、放1射免1疫等方法检测细胞内的物质合成和代谢变化等。