酵母***组DNA提取好方法

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫CN酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。

提取***组DNA和细胞核DNA是不同的方法

提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行

SDS十二***磺酸钠：可***细胞膜、核膜,并使***蛋白与DNA分离

CATB是一种抽提液,***细胞膜的~

DNA不溶于异丙1醇,异丙1醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了

适用于ＰＣＲ研究的快速提取法：

1 田间剪取植株新鲜叶片5-10ｍｇ(约2ｃｍ长)左右,新鲜叶片放于1 5ｍｌ离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。

2 用剪刀将叶片***剪细(约0 5ｃｍ长)放在点穴式研板中。

3 加入400μｌＤＮＡ提取缓冲液,用玻棒将叶***研细,直到液体变成深绿色即可。

4 再加400μｌＤＮＡ提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

5 加400μｌ氯1仿,混合均匀后,2400×ｇ离心30ｓ,将上清液转入一支新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

6 加800μｌ无水乙醇,混匀,2400×ｇ离心3ｍｉｎ。弃上清。

7 70%乙醇冲洗,风干。

8 用50μｌＴＥ缓冲液溶解,存于-20℃。

9 取1μｌ用于ＰＣＲ分析。

用乙醇沉淀DNA时为什么一定要加NaAc或N***

　　在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或N***，使Na+中和DNA分子上的负电荷， 减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时， 只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理?

　　加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。

　　在***操作实验中，磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定。