细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

经过了近十多年既漫长又短暂的发展，iPS细胞技术已经取得了举世瞩目的进展。一个个突破性的成果既给我们带来了喜悦，也带来了新的挑战，细胞重编程有望迎来一个新的研究浪潮。尽管iPS细胞有着诱人的应用前景，然而，未来iPS细胞的研究也面临着许多亟需解决的问题：

首先，效率问题。目前，诱导产生iPS细胞的率仍然很低，这与***导人的方式整合位点、表观遗传学等多种因素有关。这已成为制约iPS从实验室走向临床的***大瓶颈。因此，如何提高iPS细胞的制备效率仍是人们普遍关注的问题。

第二，安全性问题。现在诱导iPS细胞通常借助逆转录病毒为载体，将几种******转入分化细胞诱导其成为iPS细胞，而这种方法就有可能会因为外源***插入细胞***组，干扰了内源***的表达，从而诱发cancer。

细胞的鉴定

1. u表面标志分子鉴定iPS细胞能够表达多能iPS细胞特异的表面标志分子，如：ssea-1（阶段特异性胚胎抗原1），ssea-3等。这些物质在已分化体细胞表面不表达，从而鉴定。

2. u表观遗传状态鉴定iPS细胞与ES细胞具有相似的DNA甲1基化模式和组蛋白修饰情况。iPS细胞中的多能***，如oct-4，Nanong等的启动子区域CpG岛从高甲1基化转变为类似ES细胞的低甲1基化状态。

3.u***表达模式和发育潜能鉴定d. uES和iPS细胞***表达谱基本相同。iPS细胞具有发育为三个胚层的能力，并能参与生殖系的发育，这与ES细胞相同。iPS细胞的多能***启动子区域具有与ES细胞相同的高的H3K4Me3及低H3K27Me3水平。