PEG法
其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。
1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变***(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此***插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤***,在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源***导入到了HE89的原生质体中,建立了植株再生的转化体系。
PEG法虽然转化效率较高,但必须以裸1露的原生质体为受体,而且还受到***型的限制。
腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为70~90 nm的颗粒,由252个壳粒呈廿面体排列构成。每个壳粒的直径为7~9 nm。衣壳里是线状双链DNA分子,约含4.7kb,两端各有长约100 bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5'端同相对分子质量为55X103Da的蛋白质分子共价结合,可以出现双链DNA的环状结构。
***腺病毒已知有52种,分别命名为adl~ad52,研究得详细是ad2。腺病毒***组转录产生mRNA,已知的转录单位至少有5个:EⅠ区位于病毒***组左侧,可再分成EⅠA和EⅠB,与细胞转化有关;EⅡ区编码DNA结合蛋白,参与病毒的copy;EⅢ区编码出现在宿主细胞表面的一种糖蛋白;EⅣ区位于ad2***组右端,受EⅡ区编码的DNA结合蛋白质调控;第5个转录单位在病毒感1染中期合成ad2蛋白质Ⅳ。
***在染色体上的位置称为座位,每个***都有自己特定的座位。在同源染色体上占据相同座位的不同形态的***都称为等位***。在自然群体中往往有一种占多数的(因此常被视为正常的)等位***,称为型***;同一座位上的其他等位***一般都直接或间接地由型***通过突变产生,相对于型***,称它们为突变型***。在二倍体的细胞或个体内有两个同源染色体,所以每一个座位上有两个等位***。如果这两个等位***是相同的,那么就这个***座位来讲,这种细胞或个体称为纯合体;如果这两个等位***是不同的,就称为杂合体。在杂合体中,两个不同的等位***往往只表现一个***的性状,这个***称为显性***,另一个***则称为隐性***。在二倍体的生物群体中等位***往往不止两个,两个以上的等位***称为复等位***。不过有一部分早期认为是属于复等位***的***,实际上并不是真正的等位,而是在功能上密切相关、在位置上又邻接的几个***,所以把它们另称为拟等位***。某些表型效应差异的复等位***的存在很容易被忽视,通过特殊的遗传学分析可以分辨出存在于群体中的几个等位***。这种从性状上难以区分的复等位***称为同等位***。许多编码同工酶的***也是同等位***。
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