tRNA二级结构

约50%碱基配对，形成四段双螺旋，与五段非配对序列形成三叶草形结构。

该结构中存在四臂四环：

①氨基酸臂。 

②二氢尿***H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氢尿***H4N2环（DHU环、D环），特征是含二氢尿***H4N2（DHU、D）。 

③反密码子臂和反密码子环，特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接，3′端与piao呤核苷酸连接。TΨC臂（T臂）和TΨC环（Ψ环），特征是TΨC环含胸腺***H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④额外环3~21nt。

tRNA三级结构呈L形，氨基酸结合位点位于其一端，反密码子环位于其另一端，DHU环和TΨC环虽然在二级结构中位于两侧，但在三级结构中却相邻。尽管各种tRNA的长度和序列不尽相同，但其三级结构相似，提示三级结构与其功能密切相关。

植物ＤＮＡ的ＳＤＳ提取法：1 取2-3ｇ新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ｍｌ离心管中。2 加入5ｍｌ于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30ｍｉｎ(摇动数次),使提取液与样品充分混合。3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ＬＫＡｃ,剧烈振荡,冰浴保温20ｍｉｎ以上。4 2700×ｇ离心20ｍｉｎ,将上清液倒入新的15ｍｌ离心管中,(若提取ＤＮＡ用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证ＤＮＡ纯度)。5 加入4ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×ｇ离心15ｍｉｎ。6 在另一新的15ｍｌ离心管中加入5ｍｌ预冷的异丙1醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20℃冷却30ｍｉｎ以上。7 2700×ｇ离心10ｍｉｎ,弃去上清液,用4ｍｌ70%乙醇洗涤,室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ,倒去上清液。8 重复步骤7,用4ｍｌ70%乙醇洗涤,室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ,倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。9 加1ｍｌＴＥ缓冲液中溶解,加10μｌＲＮａｓｅ(10ｍｇ/ｍｌ),在37℃恒温箱中温育20ｍｉｎ。10 再加100μｌ3ｍｏｌ/ＬＮａＡｃ和2ｍｌ无水乙醇,2700×ｇ离心3ｍｉｎ,倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。11 将ＤＮＡ沉淀溶于150μｌＴＥ中,置于超净工作台内(3ｈ左右)。将ＴＥ溶液转入已灭菌的1 5ｍｌｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中,-20℃保存备用。

DNA提取过程中各种***的作用及原理

　　溶液I—溶菌液：

　　溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到***。

　　葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

　　EDTA：

　　(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，***脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);

　　(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。