不对称PCR(asymmetric PCR）枝术

两种引物浓度比例相差较大的PCR技术称不对称PCR.在扩增循环中引入不同的引物浓度.常用50~ 100+1比例。在起初的10~ 15个循环中主要产物还是双链DNA.但当低浓度引物被消耗尽后。高浓度引物介导的PCR反应就会产生大量单链DNA.

应用:可制备单链DNA部分片段用于序列分析或核酸杂交的探针。

反转录PCR(reverse transcription, RT- PCR技术

当扩增模板为RNA时。需先通过反转录酶将其反转录为cDNA才能进行扩增。RT - PCR应用非常广泛。无论是分子生物学还是临床检验等都经常采用。

修饰引物PCR技术

为达到某些特殊应用目的.如定向克1隆、定1点突变、体外转录及序列分析等。可在引物的5*-端加上酶切位点、突变序列、转录启动子及序列分析结合位点等。

随机引物扩增技术(arbitrary primedPCR, AP- PCR)

AP-PCR技术通过随意设计或选择一个非特异性引物.在PCR反应体系中.首先在不严格条件下使引物与模板中许多序列通过错配而复性。如果在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在,则可经Taq酶的作用使引物延伸而发生DNA部分片段的扩增。经一至数轮不严格条件下的PCR循环后，再于严格条件下进行扩增。扩增的产物经DNA测序凝胶电泳分离后.经放1射性自显影或荧光显示即可得到DNA***图。AP-PCR用于肿1瘤的******、******的分离;菌1种、菌株及不同物种的鉴定;遗传作图;不同分化程度或某些不同状态下的***的***表达差异等方面的研究。

差示PCR (differential PCR, d -PCR)技术

d-PCR可以定量检测标本靶***的拷贝数。它是将目的***和一个单拷贝的参照***置于一个试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带,比较两条区带的丰度，或在引物5°-端标记上放1射性核素后.通过检测两条区带放1射性强度即可测出目的***的拷贝数。

定量PCR(quantitative PCR, qPCR)技术

qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量,涉及目的mRNA和内标用相同的引物共同扩增.但扩增出不同大小片段的产物.可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用 于研究***表达。能提供特定DNA***表达水平的变化.在***1症、代谢紊乱及自身免1疫性***的诊断和分析中很有价值。

目前的病毒核酸检测***盒，多数采用荧光定量PCR方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么，核酸检测到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。

取样

采集***的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处

留样

将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖

保存

将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检

核酸提取

将样本送进实验室进行核酸提取

上机检测

将提取物进行荧光PCR扩增反应