植物的遗传转化是以植物器1官、***、细胞或原生质体作为受体,通过某种技术或途径转入外源***,获得外源***稳定表达的可育植株。遗传转化可以打破物种界限,有目的地实现物种之间或物种内部遗传物质的交流,为植物的遗传改良开辟了一条新的途径。
植物遗传转化方法就是通过特定的方式将外源***导入到受体细胞内,使之发生定向的遗传变异。目前,已经建立了多种转化系统。对于大多数遗传转化系统而言,遗传转化方法是遗传转化系统的关键环节,决定着转化的成败及效率。用于植物的遗传转化方法有许多:农杆1菌介导法、***枪法和PEG法等。
在转0***植物中,用农杆1菌介导法获得的转0***植物占80%,但大多集中在双子叶植物上。自从***枪问世以后,单子叶植物中的禾谷类作物的遗传转化获得了迅速发展。农杆1菌介导法和***枪法已成为目前用于遗传转化的主要方法。
第yi代腺病毒载体:一般将E1或E3***缺失的腺病毒载体称为第yi代腺病毒载体,此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎1症反应和免1疫反应,纯化后可以安全使用,体内表达周期可达4周。
第二代腺病毒载体:E2A或E4***缺失的腺病毒载体被称为第二代腺病毒载体,产生的免1疫反应较弱其载体容量和安全性方面有所改进,但病毒包装难度和出毒和病毒滴度下降厉害,应用相当局限。
第三代腺病毒载体:第三代载体缺失了全部的(无病毒载体,gutless vector)或大部分腺病毒***(微型腺病毒载体,mini Ad),仅可保留ITR和包装信号序列。第三代腺病毒载体***大可插入35kb的***,病毒蛋白表达引起的细胞免1疫反应进一步减少,载体中引入核基质附着区***可使得外源***保持长期表达,并增加了载体的稳定性。这一载体系统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。
腺病毒的研究简史
腺病毒对啮齿类动物有致***能力,或能转化体外培养的啮齿类动物细胞。使细胞转化只需要腺病毒***组的一部分,这些***位于***组的左端,约占整个***组的7%~10%。尽管腺病毒分布很广,但对***不出现致***性。***细胞是一类允许细胞(permissive cell),即这类细胞允许感1染入1侵的病毒在细胞内copy增殖,***后细胞裂解died而释放出大量1子代病毒。在体外培养的多种***肿1瘤细胞中均未查出腺病毒颗粒,但在人的1号染色体上有adl2的整合位点,这意味着***细胞对于腺病毒也可能是非允许细胞,即这类细胞在病毒感1染后,病毒不能在细胞内copy增殖,但可整合在受感1染细胞的***组内。这些细胞被病毒转化,表型发生改变,且可在体外期地培养传代。
版权所有©2024 产品网