PCR原理

DNA的半保留copy是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复1制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定***的体外copy。

但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。

耐热DNA聚合酶-Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

分子克1隆

PCR被广泛应用于目标DNA部分片段的克1隆，该技术被称为 PCR 克1隆。在直接PCR克1隆中，DNA（如，gDNA、cDNA、质粒DNA）的目标区域被扩增并插入到特殊设计的兼容载体中。

除了制备插入片段，PCR也是一种在在克1隆后筛选克1隆是否携带目标插入片段的有效方法。引物经过设计，可以用于确定载体中插入片段是否存在和插入方向。

原位PCR仪

它是由主机，加热模块，玻片，热盖，控制软件组成。主要是应用对细胞或***内的DNA部分片段进行原位扩增分析-即***分析，如病源***在细胞的位置或目的***在细胞内的作用位置等。是保持细胞或***的完整性，使PCR反应体系渗透到***和细胞中，在细胞的靶DNA所在的位置上进行***扩增，不但可以检测到靶DNA，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究***的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。它无需将细胞破碎提取DNA，细胞内有DNA酶的作用扩增受到一定的影响，使用不是很普遍。

该仪器主要应用于***临床研究，如***细胞等。

目前的病毒核酸检测***盒，多数采用荧光定量PCR方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么，核酸检测到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。

取样

采集***的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处

留样

将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖

保存

将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检

核酸提取

将样本送进实验室进行核酸提取

上机检测

将提取物进行荧光PCR扩增反应