随着***组测序、分子生物学检测手段的快速发展，PCR和荧光定量PCR实验，正在越来越多的实验室应用。然而，PCR作为一种高灵敏度的检测手段，PCR的实验结果也容易被各种无关的外源性DNA或RNA所干扰。

PCR实验室中，很容易发生DNA的交叉污染，污染通常来自于离心管、移液器和其他试验设备产生的DNA气溶胶，或DNA溶液污染桌面，或吸样枪不慎将样品或模板核酸吸入枪内。据估算，一个气溶胶颗粒可含48000个DNA拷贝。 因此，为保证PCR试验的数据准确，避免交叉污染，应定期对PCR实验室做DNA污染情况的监测。

PCR方法已广泛用于科研，在工业中也有不断扩大应用的趋势，它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测***污染以及检测残留宿主DNA等。

PCR在工业中的应用主要存在一个方法验证的问题，尤其是灵敏度的验证。灵敏度不够，就会发生漏检。另外，PCR所直接面对的样本是DNA，而非病原菌或DNA，因此还需要做DNA抽提，这也是要注意的。

因此，如能采用PCR检测支原体并替代药典方法，还是能节省很多时间和精力。但PCR方法的验证需要较为完整。灵敏度验证是一个重要方面。灵敏度不够，就会发生漏检。《欧洲药典》第2.6.7章（EP 2.6.7）和《日本药典》第十七版第G3章（JP G3），都规定，对于核酸扩增法（如PCR）检测支原体，如替代传统的培养法，都要求检测限达到10 CFU/ml。

具体验证可使用10CFU的支原体灵敏度标准品，它一般为冻干粉形式，需要用待测样本的样本基质（需保证里面不含支原体）来复溶，再进行DNA抽提以及PCR检测。如检测的电泳有条带，或者qPCR检测后的Ct值小于40，即表明检测成功。

RNA病毒检测***盒用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子，特别适合检测病毒等此类病毒。

组分1. ConviFlex? RT-Taq Mix的冻干粉包含：MuLV逆转录酶、Taq聚合酶及dNTP。

其中MuLV逆转录酶，来自小鼠白血1病病毒（M-MuLV）并经过***修饰。

这里的Taq聚合酶另兼具热启动功能。

此Taq酶在室温下，活性被抗1体所***，当温度达到70°C以上时，才会被完全激1活。

在70°C 以下时，由于Taq酶没有完全活化，因此实验不会产生非特异性PCR产物和引物二聚体。热启动Taq酶的使用可使PCR具有更高的特异性和灵敏度。

适用于ＰＣＲ研究的快速提取法：

1 田间剪取植株新鲜叶片5-10ｍｇ(约2ｃｍ长)左右,新鲜叶片放于1 5ｍｌ离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。

2 用剪刀将叶片***剪细(约0 5ｃｍ长)放在点穴式研板中。

3 加入400μｌＤＮＡ提取缓冲液,用玻棒将叶***研细,直到液体变成深绿色即可。

4 再加400μｌＤＮＡ提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

5 加400μｌ氯1仿,混合均匀后,2400×ｇ离心30ｓ,将上清液转入一支新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

6 加800μｌ无水乙醇,混匀,2400×ｇ离心3ｍｉｎ。弃上清。

7 70%乙醇冲洗,风干。

8 用50μｌＴＥ缓冲液溶解,存于-20℃。

9 取1μｌ用于ＰＣＲ分析。