回收产物的检测

1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰，当OD260=1时，相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时，说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。

2.SYBR法检测取回收产物1 μL，与1 μL SYBR染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。

3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μL，与10×Loading Buffer混匀，DNA Marker加5 μL，电泳后凝胶成像观察。5 μL DNA Marker相当于每个条带50 ng DNA，观察目的条带亮度大致为Marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μL。

适用于ＰＣＲ研究的快速提取法：

1 田间剪取植株新鲜叶片5-10ｍｇ(约2ｃｍ长)左右,新鲜叶片放于1 5ｍｌ离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。

2 用剪刀将叶片***剪细(约0 5ｃｍ长)放在点穴式研板中。

3 加入400μｌＤＮＡ提取缓冲液,用玻棒将叶***研细,直到液体变成深绿色即可。

4 再加400μｌＤＮＡ提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

5 加400μｌ氯1仿,混合均匀后,2400×ｇ离心30ｓ,将上清液转入一支新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

6 加800μｌ无水乙醇,混匀,2400×ｇ离心3ｍｉｎ。弃上清。

7 70%乙醇冲洗,风干。

8 用50μｌＴＥ缓冲液溶解,存于-20℃。

9 取1μｌ用于ＰＣＲ分析。

DNA提取过程中各种***的作用及原理

　　溶液I—溶菌液：

　　溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到***。

　　葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

　　EDTA：

　　(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，***脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);

　　(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。