DNA连接酶与DNA聚合酶的区别?
形成方式不同
DNA连接酶是在两个DNA部分片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA部分片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。
DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的DNA1片段上,形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用,催化原来的dna进行复1制,然后将原来的dna和复1制以后的dna进行模板配对后,连接聚合在一起,就可以形成新的dna链。
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的copy和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺piao呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD* 的DNA 连接酶。
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链3‘-OH末端和,另一DNA链的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。
所有合成cDNA条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶 [3] 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达化的Moloney鼠病毒反转录酶***的大肠中分离到的鼠病毒(MLV)反转录酶。AMV反转录酶包括2个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于RNA的DNA合成,依赖于DNA的DNA合成以及对DNA-RNA杂交体的RNA部分进行内切降解(RNA酶H活性)。MLV反转录酶只有单个多肽亚基,兼备依赖于RNA和依赖于DNA的DNA合成活性,但降解DNA—RNA杂交体中的RNA的能力较弱。且其热稳定性较AMV反转录酶差。MLV反转录酶能合成较长的eDNA(如大于2~3kb)。AMV反转录酶和MI。V反转录酶利用RNA模板合成cDNA时的适pH、适盐浓度和适温度各不相同.所以合成链时相应调整条件是非常重要的。
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