如何评价和选择支原体检测***盒

1. 灵敏度。

灵敏度常用支原体***组的拷贝数或支原体菌株的CFU表示。

2. 特异性和广谱性。

质量好的***盒应检测的支原体物种越多越多，并且特异性强，即只针对支原体，不针对其他***等微生物，没有交叉反应。

3. 稳定性。

冻干粉比液体***的稳定性高。

4. 样本类型及样本处理。

一款好的***盒，会标出它适合的样本类型，也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有***PCR反应的物质，因此需要处理。

5. 对照品。

一个好的***盒，会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测PCR是否正常。如果样本含有***PCR的物质，则内控对照的条带会发生缺失。有严重支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性***，因此支原体条带越强，内控条带越弱

信使RNA（mRNA）早先发现于1960年，在蛋白质合成过程中负责传递遗传信息、直接指导蛋白质合成，具有以下特点。 

1.含量低，占细胞总RNA的1%~5%。

2.种类多，可达105种。不同***表达不同的mRNA。

 3.寿命短，不同mRNA指导合成不同的蛋白质，完成使命后即被降解。***mRNA的平均半衰期约为1.5分钟。脊椎动物mRNA的半衰期差异极大，平均约为3小时。

4.长度差异大哺乳动物mRNA长度为5×102~1×105nt原核生物与真核生物的mRNA虽然在结构上有差异，但功能一样，都是指导蛋白质合成的模板。

用乙醇沉淀DNA时为什么一定要加NaAc或N***

　　在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或N***，使Na+中和DNA分子上的负电荷， 减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时， 只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理?

　　加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。

　　在***操作实验中，磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定。

病毒核酸提取就像'针尖上跳舞'

检验的首要一步是病毒核酸提取，这也是******的一步，需要在专门的生物安全二级实验室里进行。检测人员要在清洁区穿戴两套防护服、两副乳胶手套，戴护目镜，穿靴套，前后穿过6道门，才能到达核心实验区，病毒核酸提取就像是“针尖上的舞蹈”。“每次脱下防护服，衣服都湿透了。在2—4个小时的病毒核酸提取实验过程中，一般都会安排两人一组进行检验，既是规定要求，也是防止工作人员在密闭的负压实验空间里出现意外。