***组DNA部分片段化仪是一种用于化学、生物学领域的分析仪器。
样本破碎方式:基于自动声波聚焦(Adaptive Focused Acoustic?,AFA)原理,利用几何聚焦声波能量,通过400kHz的球面固态超声传感器可将波长为3mm的声波能量聚焦在样品上。内置冷却系统,样品处理在等温下进行,无热损伤,提高样本回收率。能量可调且控制:超声波输出功率可自由调节;专门的软件参数控制及优化的Protocol,可剪切出150 bp-5kb的DNA部分片段。
主要功能用于新一代***组测序的样本制备实验。该系统可实现由动植物材料至新一代测序上机样本制备整个过程,包括动植物材料的破碎,DNA或RNA的提取,DNA或RNA样本的机械化剪切,以及片段化后的DNA或RNA样本的回收。
DNA copy主要的特点是半保留copy、半不连续copy。在copy过程中,原来双螺旋的两条链并没有被***,它们分成单独的链,每一条旧链作为模板再合成一条新链,这样在新合成的两个DNA分子中,一条链是旧的而另外一条链是新的,因此这种copy方式被称为半保留copy。
DNA的两条链是反向平行的,一条是 5'→3'方向,另一条是 3'→5'方向。在copy起点处,两条链解开形成copy泡(replication bubble ), DNA向两侧copy形成两个copy叉(replication fork)。随着DNA的不断解旋,两条链变成单链形式,可以作为模板合成新的互补链。但是,生物细胞内所有的DNA聚合酶都只 能催化 5'→3'延伸。因此,以3 '→5'的链为模板链时,DNA聚合酶可以沿 5'→3'的方向合成互补的新链,这条链称为前导链(leading strand )。当以另一条链为模板时则不能连续合成新链,这条链称为滞后链(lagging strand )。这时,DNA聚合酶从copy叉的位置开始向远离copy叉的方向合成1?2 kb的新链片段,待copy叉向前移动相应的距离后,又重复这一过程,合成另一个类似大小的新链片段,这些片段被称为冈崎片段(Okazaki fragment)。***后,由另一种DNA聚合酶和DNA连接酶负责把这些冈崎片段之间的RNA引物除去,并把缺口补平,使冈崎片段连成完整的DNA链。这种前导链的连续copy和滞后链的不连续copy在生物细胞中是普遍存在的,称为DNA的半不连续copy。
制备互补DNA,往往需要先分离从目的***转录来的mRNA.如果该***编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此***的产物是总mRNA的主要组成部分 [2] 。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异结合所表达的蛋白质(抗原),则可从沉淀的核糖体中分离出胰岛素特异的mRNA,一般特异mRNA只是细胞总mRNA中的次要成分。在这种情况下,不得不以密度梯度离心,按分子量大小把总mRNA分开,然后把分离开的mRNA直接用于试管中表达蛋白质(用家兔网织细胞的溶胞产物或小麦胚芽提取物作为翻译系统的诱导物)再用沉淀或聚酰胺凝胶电泳从许多表达的蛋白中测定出目的蛋白,从而确定表达该蛋白的特异mRNA。
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