等温核酸***盒

重组酶聚合酶扩增技术是近年来建立起的一种新的核酸恒温扩增技术，具有操作简单、灵敏度高、特异性强、可在短时间内快速扩增出目的片段等优点，在动物***早期诊断、现地检测、进出口快速检疫等方面具有良好的应用前景。通过综述RPA技术及其在病毒性猪病快速检测中的应用研究进展，以期为更好地防控猪病提供参考。

核酸***盒

RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物***了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有***，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。

在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，TwistAmp? exo结合了exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。

基本检测原理是首先将待检产物和两种检测物混合，特异性结合后形成带有两种标记（生物素和FITC）的复合物；随后将该复合物滴加到试纸条的加样区，与加样区的胶体金颗粒结合，新形成的复合物在层析膜扩散作用下扩散至检测线，只有标记有生物素的复合物会被生物素配体捕获，从而使检测线“显色”，而未结合检测物的胶体金颗粒会继续扩散至质控线并捕获进而使质控线“显色”。

侧向流分析（LFIA）具有成本低、响应快、易于使用和高通量等优点。但LFIA与其他分析方法相比灵敏度较低，限制了其在不同领域的实际应用。进而迫切需要一种新的标记分子，不仅易于合成，而且在信号产生和放大方面具有的物理/化学性质。普鲁士蓝纳米粒子（PBNP）具有良好的生物相容性和其它的性质，如低成本、高表面体积比、易于合成和表面改性等，一直受到生物***研究者的广泛关注。