冻存袋的原理

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以较大限度的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

冻存袋的应用

对于需要保存5年以上的体外细胞的方法,-196°℃的深低温液氮保存简便,实用.冻存后的细胞损伤小活力高能保障患者移植后造血功能的早期***,反之则导致造血功能***的延迟甚至失败.原有的液氮罐保存方式是将装有千细胞的冻存袋放入圆筒状的容器中后,再放入液氮罐中保存,由于冻存袋与圆筒状的容器形状尺寸的不匹配冷冻保存时会造成冻存袋的变形导致千细胞被挤压受损甚至消灭,且受液氮罐空间限制能冻存的数量有限.针对如何经济,较大容量的保存细胞.

冻存袋，可千万别这么用哈！

1.不要使用金属管夹

2.不要离心

3.不要在冻存袋上直接写字标识冻存细胞的信息

4.不要在冻存袋表面粘帖标签不推荐使用同一冻存袋多次冻融细胞

5.DMSO稀释以后才能放进冻存袋，DMSO浓度不要超过10%

6.复苏细胞时建议把冻存袋放在一个保护袋中进行融化

7.不要超过冻存袋推荐的工作体积

冻存袋方法的改进

自1977年以来,我们应用四级梯度降温冻存法对30余株哺乳动物细胞及2株节肢动物细胞共1000多支安瓶进行了冷冻保存,效果较好,大部分细胞的活存率在70%以上。在此基础上对8株抗登革4型(DEN一4)病毒杂交瘤细胞400多支安靓进行了冻存。鉴于四级降温冻存法步骤多,需要经过4℃冰箱和一20℃冰箱长达7~8小时的梯度降温,较难适应单工作中细胞冻存的需要。因此,自1982年以来我们摸索了影响细胞冻存的主要因素,确定了杂交瘤细胞冻存的适保护剂浓度(1.2〕,并研制成功细胞冻存简易装置。