使用冻存袋的注意事项

1、使用冻存袋储存样本时，严格要求应把冻存袋放入液氮的气相层或冰箱中保存！如果冻存袋储存于液氮液体中，液氮有一定几率会渗入冻存袋内部，复苏时液氮气化导致管内外压力不平衡，这样极易造成冻存管的炸裂，并具有生物危害性。

2、冻存的样本量不要超过冻存袋要求的大工作体积。

3、用毕暂时不再使用时，应洗净并擦净活栓，在活栓处应垫一纸条，以防粘连。

细胞冻存的研究

细胞培养和保种技术广泛用于生命科学研究的各个领域，如研制、人工和再生***等。冷冻保存是目前细胞长期保存的通用方法，有利于降低细胞被微生物污染和细胞之间交叉污染的风险，并且能够减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变，避免有限细胞系出现***或转化。然而，细胞的冻存和复苏过程会对细胞造成较大损伤，降低细胞膜中的脂质含量，产生过氧化，同时影响细胞的结构和代谢途径[1-3]。

细胞冻存复苏方法

1.  细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。

2.  培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱37°C预热20min，备用。

3.  二亚砜（DMSO)在40°C冰箱中冷藏30min，备用。

4.  从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400°C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。

5.  将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。

6.  用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。

7.  记录复苏日期。

动物细胞冻存***

1. 首先准备好用于包装样本的铝箔或冷冻保存管，并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样本编号。

2. 准确切除所需***后，立即剔除结缔***和脂肪***等非研究所需的***类型。

3. 在RNase-free 的生理盐水中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物。

4. 用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹***，迅速投入液氮冷却。

5. 填写样本登记单，写明样本名称、***类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。