细胞复苏冻存袋

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；

3. 离心， 1000rpm，5min；

4. 弃去上清液，加入含10%小牛血培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；

5. 次日更换一次培养液，继续培养。

冻存袋实验前的准备

生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降温机

冷冻方法理论准备:

(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-8O℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量消失，亦可跳过此步骤直接放入-8O℃冰箱中。

(2）程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至（-8o℃以下) -120℃，再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

冻存采血袋的优点

采血袋通过连接导管与一三通管相连;所述一三通管的三个孔设置方向为两个并列相反,一个向下方向,分别连接采血袋;第二三通管和转移袋;所述第二三通管的三个孔分别连接转移袋,细胞培养袋和细胞冻存袋;所述采血袋上设置有阻塞件,所述阻塞件由PVC套管和PC折芯组成;所述采血管;一三通管的主管和支管,第二三通管的主管和支管均设有止流夹.本实用新型提供的用于细胞培养的冻存袋从采血到所需成分冷冻保存一步到位减少了成分污染,保障了成分质量要求.

冻存袋注意事项

可用于细胞在-196℃液氮中的存储和转运。所有冻存袋都是无菌即用型包装。冻存袋对于大量细胞的冻存非常方便，但使用过程中还有些小地方需要注意。较大冻存体积的推荐是参照冻存袋平放，液体厚度8mm时液体的体积。增加冻存液体的量，冻存袋到是能装下，但细胞复苏的时候就麻烦了，液体厚度太大，融化所需时间太长，细胞活率要受很大的影响啊！