为什么需要冻存袋？

细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活物开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是没有限制的。

冻存袋细胞复苏操作步骤

1.操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。

2.自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。

3.将新鲜培养基置于37℃水槽中回温，回温后喷以70酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。

4.取出冷冻管，立即放入3℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，以7O%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。

5.取出解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10~1:15)，混合均匀，放入培养箱培养。取0.1m1解冻细胞悬浮液作存活测试。

6.解冻后是否立即去除冷冻保护剂，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10m1培养基之离心管内，离心 1000rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入培养箱培养。

冻存袋的储藏空间

储藏空间内能够非常贴合地放置细胞冻存袋,并稳定细胞冻存袋,筒体亦是非常贴合地放置于冷冻装置内部,筒体底部通孔能够透进冷冻液,使得筒体处于均匀低温的状态,可较好的保持细胞活性;整个稳定装置轻便实用,能够长时间进行细胞的保存及运输,具有极高的经济效益.一种用于细胞培养的冻存袋,包括采血袋所述采血袋上至少设有一根采血针,所述采血针通过采血管与采血袋相连,

细胞冻存复苏方法

1.  细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。

2.  培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱37°C预热20min，备用。

3.  二亚砜（DMSO)在40°C冰箱中冷藏30min，备用。

4.  从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400°C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。

5.  将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。

6.  用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。

7.  记录复苏日期。