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HPLC定性分析的主要方法与技术。

使用保留值定性方法

在所有定性分析方法中， HPLC使用保留值定性分析的方法是基本的方法，他就是合理地运用色谱的一些基本知识对有机化合物所作的反应，从而得出有机化合物应具有的性质。HPLC中，两种相同的物质在同一色谱中应具有相同的保留值，因此， HPLC中的定性分析就能充分地应用到这一原理，用相同的色谱对未知物质进行简单的成分和性质判断，同时在同一物质组分下色谱上形成的未知峰保留值也是一样的，这样就可以初步判定未知有机化合物。HPLC的流动相在此基础上，适当改变流动相来判断未知有机化合物的基本性质，而在连续变化的过程中，当发现两个保留值峰值相同时，我们可以简单地判断为未知有机化合物的性质相同。尽管 HPLC的保留值定性分析方法可以区分同样的物理性质，但不能保证具有相同保留值的两个有机化合物是同一种物质，因此在实际应用中， HPLC利用保留值定性分析的方法虽然简单，而且很具操作性，但适用范围较窄，不能适应更多未知有机化合物的性质判定。

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质谱仪简介：

质谱也叫质谱仪。隔离和检测同位素的仪器。它是以带电粒子在电磁场中能够偏转的原理为基础的一类仪器，按照物质原子、分子或碎片的质量差异进行分离和检测。根据应用范围，质谱仪分为同位素质谱仪、无机质谱仪和有机质谱仪。根据分辨能力分为高分辨率、中分辨率和低分辨率质谱仪，根据工作原理分为静态仪器和动态仪器。质谱分析仪可以对样品分子进行轰击，比如高能电子流，使分子失去电子变成带正电的分子离子和碎片离子。这两种离子具有不同的质量，不同质量的离子在磁场作用下到达检测器的时间不同，结果为质谱图。

基本公式： q/m= E/B1B2r

MS分析是通过将物质离子化，分离出离子的质荷比，然后测量各种离子谱峰的强度，从而达到分析目的的分析方法。

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质谱技术的原理：

质谱技术是一种应用技术，它是基于原子、分子电离以及离子光学的理论基础，通过质谱分析可以得到无机、有机、生物分子的分子量和分子结构，能够定量或定性地分析多种混合物的各种成分。

质谱学实际上是高中物理教科书上经典的“带电粒子在磁场中的运动”的应用。简而言之，是把一个复杂的混合物放入质谱系统，把它分解成原子，分子，然后把电离注入电磁场。因为不同的带电粒子的质量和电荷比例不同，偏转时间也不同，质谱仪可以把这些时间、位置信息转化成光学数据，以质谱的形式呈现出来，直观地观察到了复杂混合物的组成。

在阴极射线中，气体原子和分子之间发生强烈碰撞，形成阳离子，几乎所有的原子，甚至包括惰性气体，都能通过低压放电，变成气态阳离子，这些阳离子构成了阳射线。有一定运动初始速度的阳离子射线通过两条狭缝进入电场，不同速度的阳离子在电场中有不同的偏转，速度小的偏转程度大，相反，速度大的偏转程度小；阳离子射出电场后也会发生偏转，而偏转程度不同的阳离子在电场中有不同的偏转。感光底片上的同一质荷比相同的阳离子聚集在相片上，形成一条短直线影像，不同质荷比阳离子在底片的不同位置产生类似光谱线的短直线影像。由于这些图像与它们的质量有关，所以被称为质谱，这种检测仪器叫做质谱仪。

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指导方针建议使用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行二级筛选

第二级筛检方法为：用LC-MS/MS技术对原17-羟孕酮、雄烯二i酮、11-脱氧皮质醇、21-去氧皮质醇、17-羟孕酮、21-去氧皮质醇、LC-MS/MS技术，计算酶反应底物与产物比值(17-羟孕酮+雄烯二i酮)/皮质醇、(17-羟孕酮+21-脱氧皮质醇)/皮质醇等来提高筛查特异度和阳性预测值，减少假阳性。

现在，国内外许多指南都建议采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行二级筛选：

*2016年6月，由中华预防***会出生缺陷防治委i员会新生儿筛查学组制定的《关于先i天性上腺皮质增i生症新生儿筛查共识》

仅用17羟孕酮进行 CAH筛检假阳性率高，阳性预测值低

采用液相色谱串联质谱技术进行 CAH二级筛选可有效地减少假阳性率，提高阳性预测值30-100%

除21-羟化酶缺乏外，也可筛查其它 CAH