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人们开发了多种不同类型的质量分析仪,不仅试图提高质谱的分辨率和质量准度,而且还改进了质谱性能的其它特征,如速度、灵敏度和动态范围。比如,四极杆质量分析仪可以获得高灵敏度的目标采集,而四极离子阱提供了的全扫描灵敏度;但是这两个分析仪的质谱和质量准度都相对较低。与此相反,基于傅里叶变换离子回旋共振(FT-ICR)的质量分析仪,提供了极高的质谱分辨率和质量准度,其高质量分辨率是可以实现的,操作和维护也更为复杂;轨道阱傅里叶变换质谱分析器的发明,虽然简化了系统的操作和维护,但是仍然以采集速度为代价。
飞行时间质谱(TOF-MS)已成为多年来一种***吸引力的技术选择。目前的TOF-MS技术很有潜力,并且在理论上具有大的质荷比(m/z),高速采集,的质量检测能力以及高灵敏度;事实上,TOF-MS技术诞生于1946年,当时,威廉·斯蒂芬斯(William Stephens)提出了在真空条件下的无场区域内,通过“飞行时间”来测量离子的质荷比(m/z)概念[2]。此后40多年的发展,包括反射和正交加技术的应用,极大地提高了TOF-MS的准度和分辨率;但是,它在获得高质量质谱数据方面仍缺乏能力。
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SCIEXP800 Plus药分析系统可广泛用于质粒 DNA纯度分析、腺相关病毒(A***)、腺相关病毒(A***)衣壳蛋白的纯度分析、腺相关病毒的等电点分析、宿主细胞残留 DNA的片段分布分析等多个方向,并具有以下优点:
1、分解性好:可用基线分离超螺旋、开环和线性质粒, A***可分离VP1、VP2、VP3蛋白,易于对产品进行定量和质量控制;
2、重复性好:超螺旋质粒:迁移时间相对标准偏差(RSD)<0.5%,相对标准偏差(RSD)<0.5%,而 A***衣壳蛋白 RSD<2%。
3、高度敏感:采用激光诱导荧光的检测模式等,检测灵敏度高;
4、操作简单:商品化***盒,自动化程度高;
5、操作简单:对不同大小的质粒进行分析;根据不同血i清型 A***血i清型,优化方法可以得到更好的纯度和等电点分析结果;
6、适用范围广、方法灵活度高:适用于不同大小范围的质粒的分析;针对不同血i清型A***,可优化方法得到更优异的纯度和等电点分析结果;
7、符合***:仪器具有操作(OQ)认证,操作软件能够进行权限设置和审计
“我在莫纳什大学工作五年,在实验室建立的早期,购买了几台 SCIEX仪器;至近,我们在整个系统中增加了两套 TripleTOF?6600系统和 QTRAP?6500+系统。实验中每一台设备都能24小时运转。研究发现阶段的实验中,每台仪器每天要处理13份样品,每份样品通常运行90分钟的纳流梯度。能处理各种样品,包括培养的细胞、***活检标本、体液和***。研究发现阶段对于理解***机制具有重要意义,可以保证我们所检测到的多肽都是与***相关且具有特异性的。该方法主要包括利用 TripleTOF获取高分辨率 MS/MS,进行发现阶段研究,转移至 QTRAP进行更敏感的靶向分析。MRM仍然是定量分析的黄金标准,在获取定量信息后,我常触发线性离子阱,采集全扫描的 MS/MS图谱,从而保证定量化合物的可信度。QTRAP是一种对低丰度肽的定量分析,它具有很好的灵敏度和重现性;使用该质谱平台后,我们把肽的检测限提高到了更高的数量级。”
”“我们是利用 SWATH?采集技术分析的先驱之一,并已发表了一篇关于用多种紧密相关的人类白细胞抗原等位***进行定量分析的1。SWATH方法非常有效,它能够定量分析超过3,000个肽段,即使是至好的 MRM试验也是如此。利用 SWATH技术,研究病原体相互作用,深入分析数据,查询含有至多成分的反应因子,或查毒或抗原表达物2。它帮助我们理解了许多病毒在阻碍早期反应时使用的小技巧。
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在分析型高i效液相色谱中,目前常用的进样阀是7725型进样阀,它的内部六通结构使进样阀的进样操作十分方便,但如果使用不当,也会造成麻烦。举例来说,在高i效液相色谱检测过程中,色谱峰异常和重复性较差的情况时有发生,这主要是由于使用方法不当造成的,要解决这类问题,需要从以下几个方面着手。
1、进样控制。当采用进样阀进样时,该阀的样品环是定量的(一般分析型进样阀的样品环体积为20 ul),因为进样阀内的样品溶液在样品环的管道中有径向的速度梯度(即在普通分析进样阀的样品环体积为20 ul)。所以,要在样品环中填充样品溶液,从而用进样阀精i确定量,就必须使进样量大于样品环体积的2倍。若用注i射器控制进样量,至大只能***样品环体积1/2的量,这样可以防止溢流管溢流而造成定量误差。
2、进样阀的清洗问题。若样品环上有至后一次进样时的残留物,则下一次***样品一定会受到污染,为了防止这一现象的发生,应按照以下步骤进行: a.进样阀有两个位置: INJECT和 LOAD。先在 LOAD位置,用一个注i射器将流动相在进样阀中清洗几次,每次用量约为40 ul; b.然后将进样阀板手柄拧入 INJECT位置时,用流动相清洗几次,每次用量还为40 ul; c.至后,再将样品注入进样阀。
按以上步骤操作,可避免进样阀门造成的污染,从而消除干扰峰,提高分析结果的准确性。
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