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以刘华芬为首的 SCIEX公司及整个丹纳赫集团的优势资源和前期应用技术积累, SCIEXLabs团队在蛋白标记、生物制药、环境监测、毒理分析、食品中过敏原分析、农兽残体分析、肉类等应用领域,提出了一系列需要解决的问题。SCIEXLabs团队在开发这些解决方案之前进行了深入的市场调查,以了解市场需求。「参考文献,总结现有方法的利弊,是发展方法的步。」“我们的工程师从用户那里获得需求的手信息,根据他们对实验方法的要求,根据现有的方法,做下一步的优化和开发,这其中还包括与各领域的主要实验室合作。至后提供给用户至简单、省时、省钱的整体实验推荐方案。
SCIEXLabs除了改善业界中已有的方法外,它的一个重要功能就是在从未被涉及的应用中使用质谱仪。比如,2015年 ASMS上的 SCIEXLabs展示了 BioBA解决方案,在这种方法出现之前,分析生物分子多采用 ELISA酶联吸附法测定 ELISA,质谱的使用非常有限。BioBA检测方案不仅包括质谱仪方法,还包括诸如自动化样品富集的样品前处理方法、样品处理试剂包、 HPLC方法、 MRM实验方法和数据处理等环节。与我们发布的其他整体解决方案一样, BioBA包含了上述所有步骤的详细方法,我们将整个分析思想展示给仪器使用者。「过去工业界没有清晰的思路靠质谱来解决问题,有了全套解决方案,使用者便可轻松掌握有效的分析途径。」
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如何分析光谱图的高i效液相色谱?
实际上色谱图只是简单地说一个横坐标就是时间纵坐标是电信号的二维图谱。
高i效液相色谱法,你可以简单想象一下,固定相是一种多空海绵状的柱形结构,样品从孔中流出。由于各物质吸附能力不同,因此在色谱图上就会出现差异。
有关试验参数:
其保留时间为溶质通过色谱柱的时间。这个特征可以在一种混合物的多个部分中i共享,这也是为什么要使用 MS方法。得到的色谱图显示了强度和保留时间的关系(存在的组分)。
1.保留时间:即可定性的数据参数
若用相同的柱子,相同的流动相,分析相同的样品,则该样品的保留时间,应固定。在不同保存时间的色谱峰上,显示的是不同的物质。若要采用反相色谱法,则色谱峰越远,其对应物质的极性就越小。
2、峰面积:即可量化的数据参数
在滤波后进行峰值检测,其中峰值表示成分或成分的断裂。峰顶可根据覆盖的高度或面积选择。根据已知峰与存在峰的匹配,我们可以用眼睛来识别某些峰。它有助于确定分子的存在,或者分子中有多少原子的存在。
在分析型高i效液相色谱中,目前常用的进样阀是7725型进样阀,它的内部六通结构使进样阀的进样操作十分方便,但如果使用不当,也会造成麻烦。举例来说,在高i效液相色谱检测过程中,色谱峰异常和重复性较差的情况时有发生,这主要是由于使用方法不当造成的,要解决这类问题,需要从以下几个方面着手。
1、进样控制。当采用进样阀进样时,该阀的样品环是定量的(一般分析型进样阀的样品环体积为20 ul),因为进样阀内的样品溶液在样品环的管道中有径向的速度梯度(即在普通分析进样阀的样品环体积为20 ul)。所以,要在样品环中填充样品溶液,从而用进样阀精i确定量,就必须使进样量大于样品环体积的2倍。若用注i射器控制进样量,至大只能注射样品环体积1/2的量,这样可以防止溢流管溢流而造成定量误差。
2、进样阀的清洗问题。若样品环上有至后一次进样时的残留物,则下一次注射样品一定会受到污染,为了防止这一现象的发生,应按照以下步骤进行: a.进样阀有两个位置: INJECT和 LOAD。先在 LOAD位置,用一个注i射器将流动相在进样阀中清洗几次,每次用量约为40 ul; b.然后将进样阀板手柄拧入 INJECT位置时,用流动相清洗几次,每次用量还为40 ul; c.至后,再将样品注入进样阀。
按以上步骤操作,可避免进样阀门造成的污染,从而消除干扰峰,提高分析结果的准确性。
在高i效液相色谱分析中,常采用和配制流动相。常用的高i效液相色谱法试剂至好是试剂,如色谱纯化试剂等。当要求不太严格时,纯级甚至是分析纯的试剂都可以使用。紫外检测器是常用的高i效液相色谱分析方法,因此,应从降低基线噪声和提高分析灵敏度的角度考虑,采用紫外吸收小、杂质少的纯紫外吸收剂。
1.过滤流动相。在使用前,准备好的流动相要用0.5 um口径的微孔滤膜进行过滤。因为溶液中含有许多用肉眼很难发现的微粒,如果不滤除它们,泵口、柱头上的过滤器就会堵塞,从而阻塞了流动相的正常通道,使色谱柱的阻力增大,柱效降低。遇到此情况时,换用过滤过的流动相,拆开堵塞过的过滤器,浸在20%的水溶液中,用超声波清洗机清洗20分钟,以除去滤片上的堵塞。
2、流动相的脱气。在使用之前,必须先除气,以便尽可能地去除溶解在流动相中的气体,否则,这些气体会使柱填料的性能下降,并对检测器的信号产生较大的干扰。目前,各种脱气方法有超声波脱气、真空脱气、氮气脱气等。目前应用至多的是真空脱气法和氮气流法。在无气状态下,水与混合时会产生大量的气泡,气泡会进入色谱柱和检测器中,影响分析工作的正常进行。
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