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以下列出了一些色谱柱的清洗溶剂和顺序,作为参考:以正已烷(或庚烷)、和的硅胶柱依次冲洗,然后按相反的顺序冲洗,所有的溶剂必须严格脱水。可以清洗掉残留的强极性杂质,并对硅胶表面进行活化。反相柱用水、、、(或)依次冲洗,然后按反序冲洗。若下一步分析所用的流动相不含缓冲液,就可以忽略一步用水冲洗。可洗去残留的非极性杂质,多次在()冲洗时多次***100-200μ l四氢,有助于去除强疏水性的杂质。四氢与或混合溶液可去除类脂。有时候还要***几次二甲砜。用0.1%的、、三梯度洗脱可去除蛋白质污染。用稀酸缓冲洗阳离子交换柱,用稀碱缓冲液冲洗,把交换性能很强的盐去掉,再用水、、(除去固定相表面吸附的有机物)、、水,依次冲洗。
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保存色谱柱时,柱中应充满或,柱连接处应紧固,防止溶剂挥发干燥。请勿将缓冲液留在柱内待一夜或更久。8、在使用色谱柱时,如果压力升高,有一种可能是烧结过的滤片被堵塞,此时应更换滤片或取出清洗;还有一种可能是大分子进入柱内,使柱头受到污染;如果柱效降低或色谱峰变形,可能会出现柱头塌陷,体积增大。当出现后两种情况时,小心将柱头接头拧开,用洁净的小钢将柱头填料取出1~2 mm的高度(注意将污染的填料取净)再将柱内填料整平。接着将其填充到色谱柱中,用合适的溶剂润湿固定相(与柱相同),压平,然后拧紧柱接头。这种处理后柱的效能有所提高,但难以***到新柱水平。柱失效一般为柱端,在分析柱前安装与分析柱相同固定相的短柱(5-30毫米),可起到保护、延长柱寿命的作用。使用保护柱会失去一些柱效,这是值得的。
关于检测池,有时候还会遇到一个小问题,就是检测池里的气泡,气泡是哪儿来的,可能是流动相中溶解的气体,也可能是仪器长时间不使用检测池干了导致的,体现在仪器的表现上,就是基线噪音某明其妙的变大,出现毛刺等等,这个时候,可以先观察系统压力,如果压力平稳正常,可以判断这个波动应该不是由于泵造成的,那肯能就是由于检测池里的气泡造成的了,对付这个气泡,没有太好的办法,只能用纯慢慢冲,不过倒是有个小办法可以防止,就是在检测器的出口出用一小段细内径的PEEK管憋上一点压力可以很大程度的预防气泡的产生,但是注意千万不要太长,有大概3~5厘米的长度就够了。
1.气相色谱的若干概念气体色谱法利用气体作为流动相,根据组分与固定相间分配吸附力的差别,实现复杂样品分离的分离技术。实验结果表明,分离对象为挥发性、热稳定性好、沸点在500度以下。煤气:空气输送——用来传送整个系统样品的气体。探测器气体——某些探测器需要的支撑气体,例如, FID。介绍样本:向载气中引入样品蒸汽的过程。这个工艺对样品蒸汽的影响小。色谱柱:完成样品成分分离。探测器:识别并响应外流柱中的样品组成。资料收集:把检测器的信号转换成色谱图,进行手动或自动定性、定量分析。
QMS采用 QMS作为质量过滤器, TOFMS作为质量分析工具。 好处:能提供高质量的鉴别;与 ***相比,定好;快速,适用于大分子量复杂样品的生命科学分析。 劣势:费用高;要细心维护。 代表产品:Agilent 6545Q-TOFLC/MS系统:具有较高的分离能力和灵敏度,比以往的常规分析仪提高了5倍以上,具有快速强大的自动调谐功能,对小分子化合物的分析效果好。Brokimpact II四极杆飞行时间质谱仪:50 GBit/秒的采样率,高分辨率下的稳定数据采集没有问题,适用于高通量定量方面的应用。德国布鲁克的 Maxis超分辨率 QTOF就是这款产品的卖点,它能在每秒20谱图下保持60,000分谱图。
离子阱-飞行时间质谱, Trap TOF利用三维离子阱作为质量选择器和反应器,结合了离子阱多级质谱能力和飞行时间质谱的高分辨率。好处:多层次、多层次、高分辨率同时适用于对未知样品如糖蛋白定性等的定性工作。 劣势:受离子阱容量限制,混合样品的灵敏度较差;量化能力薄弱。代表产品:岛津LCMS-IT-TOF质谱计:貌似二百万以上?使用过的同学都表示这台仪器做分子量还不错,不用 lockmass。但是软件界面太多,有点挤,买一个超过24寸的超大显示器比较好。本仪器的 M***S碎片并不多,正负极可快速切换。磁质谱法、质谱法在各种质谱中,磁质谱的数量。目前应用较少,仅用于检测地质元素及痕量。 好处:工艺经典、成熟、仪器, NIST等 MS库;分辨率极高(100 k, m/和 Delta m FWHM),干扰小;具有较高的灵敏度和定量能力,质量高。 劣势:容积,重量;价格昂贵;慢速;维修复杂,费用高。
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固体萃取柱(SPE)是一种集选择性保留、选择性洗脱等分离技术,又称固相萃取法。复合样品溶液通过吸附剂(Sorbent)时,吸附剂通过极性相互作用、疏水作用或离子交换等作用力选择性地保留了目标物和少量与目标物相似的组分,其它组分通过该吸附剂流出小柱,然后用另一种溶剂体系选择性地将目标物洗脱,从而实现了复杂样品的分离纯化、浓缩和浓缩。“保持”(Retention)和“洗出”(Elution)都受到目标、吸附、溶剂等三个因素的影响,成功分离的关键是要对已知目标物进行适当的吸附、试样溶剂及洗脱溶剂。
全自动固相萃取仪能抵抗大部分化学物品的腐蚀,同时具有耐热、防火、防潮等功能。虽然物理功能很少被损坏,但即使它的性能再好,在使用期间也要定期维护。对设备的***和使用寿命进行维护十分重要。
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