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色谱柱一般用硅胶作基质,只能在pH2-9的范围使用。柱使用一段时间后,可能会有一些吸附作用强的物质留在柱顶,尤其是一些有色物质更容易在柱顶的填料上看到。在使用一段时间后,新的柱顶填料会塌陷,使柱效降低,此时还可补加填料,使柱效***。如 ODS柱,在每次工作结束后用强力洗脱剂,如 ODS柱,以冲洗到基线平衡。用盐缓冲液作流动相时,用完后用无盐流动相冲洗。含有卤族元素的化合物(氟、氯、)可能对不锈钢管道造成腐蚀,不适合长时间接触。HPLC仪柱式安装如果不经常使用,应每4-5天开一次电源,冲洗15分钟。
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探测器的维护1.光源部分探测器的重要组成部分是光源,光源对发射能量有要求,一旦能量衰减到一定程度,就会出现一系列影响光源使用的问题,如基线噪声变大、灵敏度下降等。一般 UV灯的使用寿命为2000 h,当达到这一时,我们就特别注意灯的能量状况,可通过仪器维护软件中自带的“灯能测试”功能判断,测试结果将分别评估低、中、高三个波长段的能量,一旦某一波长段测试结果显示失败,就表示需要更换灯。2.检测池探测器的另一个重要组成部分就是检测池,也称为循环池。一般来说,检测池是大家比较关心的问题之一,因为检测池的耐压能力一般都不高,所以一旦被堵住,很容易造成损坏。实际上,检测池一般不太容易堵塞,因为几乎所有的颗粒杂质都会被色谱柱截获,因此堵塞检测器的东西基本不是来自样品,很可能是后来“产生”,例如,含盐流动相残留在检测池中导致盐析出。六、废液处理LC废液中大部分含有,对***有一定的危害,对环境也会造成污染,严禁随意倾倒,应及时处理。当前,国内大多数实验室都是把废液运往废液处理站进行无害化处理。
先要认识到,一般国产其实不需要额外的过滤处理,直接使用是没有问题的。甚至某些固体颗粒杂质,都可以从液相流路系统前端的过滤头中排除。真正容易出现问题的是水中的***。新制纯水在室内放置数天后会产生***,而这些***虽然肉眼看不到,却足以堵塞柱状填料颗粒的空隙,导致柱子迅速报废。
色谱仪是一种易学难用的仪器,尤其注重仪器的正确使用。流体工作者接触到流动相,流动相是引起液相色谱各种问题的主要来源。液相色谱仪常见的故障有堵塞和漏漏。以下对这两点分别展开讨论。(注:流动相以为例,色谱柱以C18为例)“堵”的现象是柱压异常升高,直接原因是流路不畅。造成“堵塞”的原因:流动相中的***污染。阻塞主要发生在色谱柱前端,流动相中存在杂质,***是杂质的主要来源。长时间,滤头粘附***,造成泵液不能正常工作这一问题的解决办法就是保证水的可靠性。以下是两种建议方法:(1)好购买实验室纯水机,既方便又可靠,质量也放心。的缺点是价格昂贵。(2)成箱购买市售品牌纯净水,如怡宝或娃哈哈500 ml,这些水的质量足以满足液相色谱的要求。有一个细节值得注意:在绝大多数书籍中,凡谈到配制流动相到都要进行过滤的步骤。
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探测器带来的影响
作为一个例子,热导检测器 TCD就是利用 TCD的载气和被测气体的导热系数不同,在桥上检测产生的不平衡电压与被测成分的浓度成比例,实现了被测成分的测量。①污染 TCD检测器可引起基线漂移或出现阶基线,并可产生高噪声。② TCD热阻丝烧断,基线降到零点。③ TCD电源的供应不稳定,出现不规则的脉冲干扰峰。
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载气效应
载气将分析试样流过固定相,分离后的气体连续一次被载气带出色谱柱,送到检测部位进行检测。液相色谱分离效率受载气流量、载气特性和载气压力等操作条件的影响。①载气量较低,会使气液保持时间增加,灵敏度下降,或出现圆形、拖尾峰。②载气量偏大,会造成噪声大或不能分离的组分。③载气控制不稳定,会引起不规则基线漂移或波状基线漂移。上述情况要检查减压阀是否超出使用范围,如有必要应更换减压阀,再检查是否有漏气现象。
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