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以下列出了一些色谱柱的清洗溶剂和顺序,作为参考:以正已烷(或庚烷)、和的硅胶柱依次冲洗,然后按相反的顺序冲洗,所有的溶剂必须严格脱水。可以清洗掉残留的强极性杂质,并对硅胶表面进行活化。反相柱用水、、、(或)依次冲洗,然后按反序冲洗。若下一步分析所用的流动相不含缓冲液,就可以忽略一步用水冲洗。可洗去残留的非极性杂质,多次在()冲洗时多次***100-200μ l四氢,有助于去除强疏水性的杂质。四氢与或混合溶液可去除类脂。有时候还要***几次二甲砜。用0.1%的、、三梯度洗脱可去除蛋白质污染。用稀酸缓冲洗阳离子交换柱,用稀碱缓冲液冲洗,把交换性能很强的盐去掉,再用水、、(除去固定相表面吸附的有机物)、、水,依次冲洗。
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保存色谱柱时,柱中应充满或,柱连接处应紧固,防止溶剂挥发干燥。请勿将缓冲液留在柱内待一夜或更久。8、在使用色谱柱时,如果压力升高,有一种可能是烧结过的滤片被堵塞,此时应更换滤片或取出清洗;还有一种可能是大分子进入柱内,使柱头受到污染;如果柱效降低或色谱峰变形,可能会出现柱头塌陷,体积增大。当出现后两种情况时,小心将柱头接头拧开,用洁净的小钢将柱头填料取出1~2 mm的高度(注意将污染的填料取净)再将柱内填料整平。接着将其填充到色谱柱中,用合适的溶剂润湿固定相(与柱相同),压平,然后拧紧柱接头。这种处理后柱的效能有所提高,但难以***到新柱水平。柱失效一般为柱端,在分析柱前安装与分析柱相同固定相的短柱(5-30毫米),可起到保护、延长柱寿命的作用。使用保护柱会失去一些柱效,这是值得的。
色谱柱的使用与维护色谱柱的正确使用与维护非常重要,一不小心就会降低柱效,缩短使用寿命,甚至损坏。为了维护色谱柱,在进行色谱分析时,必须注意以下问题。调整流量过快…防止压力、温度急剧变化和机械振动。气温骤降或使色谱柱从高处落下,都会影响柱内填充状态;柱压突然升高或降低,也会对柱内填充物产生冲力,所以在调节流速时要缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前面所述)。反向色谱柱…一般情况下,色谱柱不能反冲,只有生产者指示柱可以反冲时,才能反冲去除留在柱头的杂质。反之,反向将迅速降低柱效。前柱与保护柱…为了避免***固定相,应选择适当的流动相(特别是 pH)。有时候,一预柱可以在进样器前连接,分析柱是硅胶粘合时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱前先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质溶解。不要把复杂的样品,特别是生物样品直接注入到柱中,需要对样品进行预处理,或者在进样器与色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般为填充具有相似固定相的短柱。可以也应该经常更换保护柱。
如何排除小概率故障?【1】泵压跳动,跳动范围约10 bar。对策:原来的小白头有点脏,换了之后还没有解决;2、将主动阀上的阀芯取出后,发现类似气泡存在,在超声5分钟内浸入-水溶液中试着除去气泡,重新安装后观察,仍未解决;更换新阀芯,安装完毕后,再也没有跳动,观察一段时间后比较平稳,顺利解决。
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石英玻璃因其耐高温、化学稳定性好而被广泛用作分析仪器反应器,用于元素仪常规样品测定中所用的氧化管、还原管、灰管等,基本上是石英玻璃制品。石英管的使用寿命,主要取决于它的材料质量,其次正确的使用和***也非常重要,下面就此提出一些建议:
1、石英反应管碰撞易
在加载氧化剂、还原剂、清除失效催化剂时,需要注意,在使用过程中,要注意不要与石英管碰撞(结块的氧化铜)。内封管塞,可涂一点高真空润滑脂(涂多了碳空白会高),装入时管塞与管口要垂直对正,缓慢旋转插入,取出时也应如此操作,否则易导致管塞崩口。当反应管装入仪器时,应清除管内所有的指印,避免结晶区的形成导致石英过早老化。
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2、石英反应管与分析样品发生反应而引起的腐蚀
含有硼、硅、磷、氟、、硒等非金属和含有钾、钠、钙、镁、锌、镉、铯、钇、锑、铋等金属的有机物在分析过程中,生成的氧化物、酸、碱、盐、微尘类物质会损害石英管,量小造成石英管的腐蚀,量大则直接导致石英管的,有许多还毒化管内催化剂。所以在进行此类物质分析时,应将陶瓷或不锈钢灰条替换为保护石英反应管,并将相应的氧化吸收剂覆盖到反应管或样品上,防止其副反应发生。若含氟样品在反应管中填充氧化镁、银盐、红铅类催化剂,在含硅样品上可覆盖氧化钨和氧化铬或氧化铜粉末;含碱金属、碱土金属的样品,可覆盖、三氧化钨等催化剂,还可以根据副反应发生的类型和过程加入多种氧化剂的混合物。石英管中碱含量较高,建议更换不锈钢反应管。
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气固色谱填充柱
色谱分离的基本原理是在样品通过色谱柱时与填料发生相互作用,这种相互作用大小的差别使得各组分相互分离,并以顺序排列从色谱柱中流出。将色谱柱中不动、起分离作用的填料称为固定相。气固层析填充柱通常用固体物质作为固定相。这类固相包括具有吸附活性的无机吸附剂、高分子多孔微球和经化学粘结的固体物质等。
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无机吸附剂
该类型吸附剂包括强极性硅胶、中极性氧化铝、非极性炭物质以及具有特殊吸附作用的分子筛。大部分可在高温下使用,吸附容量大,热稳定性好,是分析*性气体和气态烃混合物的理想固定相。但是使用时应注意:⑴吸附剂的吸附性能与它的制备、活化条件密切相关。由于来源相同或同批不同品种的产品,其吸附性能可能会有较大的差异;(一)具有催化活性,不宜在高温条件下使用,且不能同时存在活性组分;③吸附等温线一般是非线性的,进样量大时容易出现色谱峰形不对称。
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