ELISA***盒——会出现的问题及解决办法

标准曲线线性不佳，或是平行性不好。

a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因：操作时间拖太久。

解决办法：请在方法熟练后再进行操作。

c.原因：微孔间相互污染。

解决办法： 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。

解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因：添加样品或***的操作方法不正确。

解决办法：加样品或***时，吸头请勿接触微孔。

f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。

解决办法：请随时监控洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

Elisa***盒操作步骤 

1．用盖片镊Elisa***盒将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；

5．将Elisa***盒培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出现颜色 弃去底物，重新配置

3  样品稀释液污染 弃去稀释液，重新配置

4  吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底 吸头尽可能一次性使用

5  不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间） 常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求。

6  偶联***（strept***idin-HRP）浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度

7  ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板

8  没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

9  样本溶血严重 建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。