亲和柱净化步骤

注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!

----3mL柱管取出上方堵头，减去上堵头螺纹下突出部分，插回柱子上，另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象，不影响亲和柱的使用);

----准确移取上述混匀滤液，注入针筒中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过亲和柱;

----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液，先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗，再用10 mL 10%水冲洗柱子，之后用10mL水冲洗柱子。)，流速1秒/滴，弃去流出液，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体;

----准确加入1.5mL(色谱级)洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，进行相关测定。

亲和柱亲和层析过程中的注意事项

1、上样

亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短，通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等，以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。

2、洗脱

亲和层析的另一个重要的步骤就是要选择合适的条件使待分离物质与配体分开而被洗脱出来。亲和层析的洗脱方法可以分为两种：特异性洗脱和非特异性洗脱。

亲和柱——亲和层析的用途

简单来说，亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。

亲和层析常见的用途是纯化重组蛋白。亲和层析是从粗混合物中纯化蛋白质或核酸的较佳选择。如果蛋白质的分子量，疏水性，电荷等未知，亲和色谱法仍可适用于这种情况。一个典型例子是尝试分离具有特定活性的酶时，可以用与所选底物相似或相同的连接配体构建亲和柱。