***复合亲和柱
复合柱规格:除IAC208/IAC214为6ml外,其余都为3ml,
IAC201AZ-玉米赤霉烯酮2合1亲和柱
IAC202AO-赭曲霉A 2合1亲和柱
IAC203AOZ-赭曲霉A-玉米赤霉烯酮3合1亲和柱
IAC204ADOZ-呕吐-赭曲霉A-玉米赤霉烯酮 4合1亲和柱
IAC205DZ呕吐-玉米赤霉烯酮 2合1亲和柱
IAC206OZ赭曲霉A-玉米赤霉烯酮2合1亲和柱
IAC207ADZ-呕吐-玉米赤霉烯酮3合1亲和柱
IAC208ADOFTZ-呕吐-赭曲霉A-伏马-T2-玉米赤霉烯酮6合1亲和柱
IAC209 DTZ 呕吐-T2-玉米赤霉烯酮3合1
IAC210 ADOFZ-呕吐-赭曲霉A-伏马-玉米赤霉烯酮5合1亲和柱
IAC211 ADOFTZ-呕吐-赭曲霉A-伏马-T2-玉米赤霉烯酮-杂色曲霉7合1亲和柱
IAC212 FZ伏马-玉米赤霉烯酮2合1亲和柱
IAC213 ADFZ-呕吐-伏马玉米赤霉烯酮4合1亲和柱
亲和柱净化步骤
注意:整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!
----3mL柱管取出上方堵头,减去上堵头螺纹下突出部分,插回柱子上,另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断,然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象,不影响亲和柱的使用);
----准确移取上述混匀滤液,注入针筒中,调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过亲和柱;
----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液,先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗,再用10 mL 10%水冲洗柱子,之后用10mL水冲洗柱子。),流速1秒/滴,弃去流出液,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体;
----准确加入1.5mL(色谱级)洗脱,流速自然重力,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液,进行相关测定。
亲和柱——亲和层析的用途
简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。
亲和层析常见的用途是纯化重组蛋白。亲和层析是从粗混合物中纯化蛋白质或核酸的较佳选择。如果蛋白质的分子量,疏水性,电荷等未知,亲和色谱法仍可适用于这种情况。一个典型例子是尝试分离具有特定活性的酶时,可以用与所选底物相似或相同的连接配体构建亲和柱。
亲和柱——亲和层析的应用
抗原和利用抗原、之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上,就可以从中分离其对应的。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低,用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离,而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原,经动物后制备,将与适当基质偶联形成亲和吸附剂,就可以对发酵液中的所需蛋白质进行分离纯化。抗原、间亲和力一般比较强,其解离常数为108-10?12M,所以洗脱时是比较困难的,通常需要较强烈的洗脱条件。可以采取适当的方法如改变抗原、种类或使用类似物等来降低二者的亲和力,以便于洗脱。
另外金***球菌蛋白A(ProteinA)能够与球蛋白G(IgG)结合,可以用于分离各种IgG。
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