ELISA***盒的操作方法——间接法

以下是北京中检维康生物技术有限公司为您一起分享的内容，北京中检维康生物技术有限公司***供应ELISA***盒，欢迎新老客户莅临。

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

6.然后用DDW洗涤。

其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。

Elisa***盒的注意事项

Elisa***盒是否灭活：加热可灭清中补体系统，在较少数情况下（培养ES细胞，平滑肌细胞时）建议灭活，在培养其余细胞时不建议灭清。灭活非常容易产生沉淀，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃原则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。

Elisa***盒培养基：无培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，但是，仍然是培养液中基本的添加物，尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时，常常会先使用有的培养液进行培养，待细胞生长旺盛后再换成培养液。

Elisa***盒操作步骤

1、固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。

2、包被或抗原的挑选：将或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。

3、 酶标记作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法'，在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。

4、酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

样品或标准品OD超出正常范围

1  错误的样品或标准品的稀释  完全按照说明书稀释

2  偶联***浓度过高  按照说明书调整到的浓度

3  TMB底物孵育时间过长  调整到合适的孵育时间

4  样品或标准品污染  避免污染

5  错误的孵育时间或温度