做亲和柱时，使用Sepharose 4B 和 Sepharose CL-4B有何不同？

Sepharose 4B指4%的琼脂糖

Sepharose CL-4B指4%高度铰链的琼脂糖

他们的区别在于铰链程度不一样，在亲和层析色谱中，介质铰链程度越高，化学稳定性就应该越高。这样就可以耐受更加苛刻条件洗脱而偶联的配基不会脱落。越是硬质的介质，耐受的流速也会越高。这样更节省平衡洗脱的时间。

亲和柱原理介绍

亲和层析（IAC）可称为色谱技术，是一种利用抗原特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将抗、惰性微珠共价结合，然后装入小柱，将被测溶液流过亲和柱，而非目标化合物则沿柱流下，然后用洗脱缓冲液洗脱抗原（被测物），从而得到纯化的抗原（被测物），收集的抗原样品液可直接用于 HPLC 分析或处理后用荧光光度计检测。

亲和柱——亲和层析的用途

简单来说，亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。

亲和层析常见的用途是纯化重组蛋白。亲和层析是从粗混合物中纯化蛋白质或核酸的较佳选择。如果蛋白质的分子量，疏水性，电荷等未知，亲和色谱法仍可适用于这种情况。一个典型例子是尝试分离具有特定活性的酶时，可以用与所选底物相似或相同的连接配体构建亲和柱。