亲和柱介绍

生物分子之间的亲和识别包括***和抗原、酶和底物和受体等之间的亲合作用，这些亲和作用属于生物专一性识别；此外，某些物质和生物大分子之间还有一些特异性作用，如染料和某些酶（特别是脱氢酶和激酶等），植物凝集素和糖蛋白，金属离子和蛋白质表面的组氨酸等之间的作用，都可以应用于亲和分离过程。

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亲和柱亲和层析技术原理

IAC也是色谱技术的一种,可称为色谱技术,是一种利用抗原特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将与惰性微珠共价结合,然后装柱,将抗原溶液过亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,然后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原,用适当的缓冲液和合适的保存方法,柱可以再生备用。其提纯效率很高,通常只需一次就可达到1000～10000倍的纯化效果(王泽永,2002)。

亲和柱——亲和层析的原理

通常，在开始亲和层析前需要预***行全细胞提取物的粗制，例如细胞裂解液，生长培养基。

首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中，其中含有某类特定的生物大分子（从DNA到蛋白质，取决于实验需求）。等待一段时间使两相充分混合，随后将洗涤缓冲液倒入色谱柱中。洗涤缓冲液通过***非目标生物分子与固定相的较弱结合来去除非目标生物分子。目标生物分子对固定相具有较高的亲和力，因此能够保持与固定相的结合，而不会被洗涤缓冲液冲走。然后将洗脱缓冲液倒入含有剩余目标生物分子的色谱柱中。洗脱缓冲液比洗涤缓冲液，能够从更大程度上减弱靶生物分子与固定相之间的相互作用，从而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱缓冲液和目标分子，称为洗脱液。

固定相一般是凝胶基质，常见的有琼脂糖。为了防止目标分子与配体结合过程中的空间干扰或重叠，首先将含有烃链的***连接到琼脂糖珠（固体支持物）上。这种具有烃链的***通常被称为琼脂糖珠和靶分子之间的间隔基。