ELISA***盒——ELISA实验通用规则

1、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

Elisa***盒的注意事项

Elisa***盒是否灭活：加热可灭清中补体系统，在较少数情况下（培养ES细胞，平滑肌细胞时）建议灭活，在培养其余细胞时不建议灭清。灭活非常容易产生沉淀，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃原则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。

Elisa***盒培养基：无培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，但是，仍然是培养液中基本的添加物，尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时，常常会先使用有的培养液进行培养，待细胞生长旺盛后再换成培养液。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出现颜色 弃去底物，重新配置

3  样品稀释液污染 弃去稀释液，重新配置

4  吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底 吸头尽可能一次性使用

5  不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间） 常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求。

6  偶联***（strept***idin-HRP）浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度

7  ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板

8  没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

9  样本溶血严重 建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。

样品或标准品OD超出正常范围

1  错误的样品或标准品的稀释  完全按照说明书稀释

2  偶联***浓度过高  按照说明书调整到的浓度

3  TMB底物孵育时间过长  调整到合适的孵育时间

4  样品或标准品污染  避免污染

5  错误的孵育时间或温度