什么是试剂盒?
ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联试剂盒、酶联吸附测定试剂盒、酶联分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。
ELISA试剂盒的操作方法——双夹心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
ELISA试剂盒-ELISA检测原理介绍
酶联吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)指将可溶性的抗原或结合到聚乙烯等固相载体上,利用抗原结合专一性进行反应的定性和定量检测方法。它是应用比较多的一种酶技术。ELISA试剂盒(ELISAKits)已成为药品和植物病理学研究中的常用诊断工具,是检测组织提取液和细胞培养液中目标/抗原的理想工具,也是重要的质量控制手段。
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