Elisa***盒实验原理

将目标包被于微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生***的目标，将未结合的生物素洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的***。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

Elisa***盒注意事项

Elisa***盒解冻与存放：-20℃取出后建议放入2～8℃冰箱中解冻约，每隔一段时间轻轻摇晃均匀，不可直接放入温度较高处解冻，避免因温度改变太大，造成蛋白质凝集而出现沉淀，其质量下降。若短期无法用完一瓶，建议无菌分装,再放回冷冻，避免反复冻融。4℃长时间保存后的变性脂蛋白及纤维蛋白，形成絮状物质变差。

Elisa***盒的注意事项

Elisa***盒是否灭活：加热可灭清中补体系统，在较少数情况下（培养ES细胞，平滑肌细胞时）建议灭活，在培养其余细胞时不建议灭清。灭活非常容易产生沉淀，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃原则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。

Elisa***盒培养基：无培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，但是，仍然是培养液中基本的添加物，尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时，常常会先使用有的培养液进行培养，待细胞生长旺盛后再换成培养液。

Elisa***盒的操作注意事项

洗刷是ELISA***盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的反响物，间断抗原***反响，除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。

断定效果须运用Elisa***盒测读仪，比色法判读可选择单波长或双波长，根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片，以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。具有杰出的重复性。