ELISA***盒的制备方法

包括以下步骤：

1)抗原表位的计算机筛选；

2)抗原的制备；

3)采集；

4)间接ELISA方法的建立；

5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证；

6)***盒的稳定性验证；

7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出戊型病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊病毒的流行和阻断戊病毒由猪向人传播。

ELISA***盒——会出现的问题及解决办法

吸光值均偏高(或线性不够陡)。

a.原因：室温太高(>25℃)。

解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因：底物溶液受到污染。

解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。

c.原因：反应时间超过太久。

解决办法：请控制反应时间。

d.原因：酶标记物污染了盒内其它***。

解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免***间相互污染，凡是***(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留)

Elisa***盒实验原理

将目标包被于微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生***的目标，将未结合的生物素洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的***。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

Elisa***盒操作步骤

1、固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。

2、包被或抗原的挑选：将或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。

3、 酶标记作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法'，在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。

4、酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。