ELISA***盒的组成结构

1、 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内***的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 ***匀浆：将***加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

此IBL***盒能用于小鼠清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测。

Elisa***盒的注意事项

Elisa***盒是否灭活：加热可灭清中补体系统，在较少数情况下（培养ES细胞，平滑肌细胞时）建议灭活，在培养其余细胞时不建议灭清。灭活非常容易产生沉淀，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃原则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。

Elisa***盒培养基：无培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，但是，仍然是培养液中基本的添加物，尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时，常常会先使用有的培养液进行培养，待细胞生长旺盛后再换成培养液。

Elisa***盒有哪些需要注意的？

1. 跟着病况的进展或由其他因素影响，某些在机体内的含量发作大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反响。

2. 加样一般运用加液器，在ELISA***盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加间断液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶结合物、底物和间断液时则不需更换吸嘴。

3.在成批手艺检测中，还应留神操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原反响和酶促反响时间不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不留神可能会导致过错效果或定量不准。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出现颜色 弃去底物，重新配置

3  样品稀释液污染 弃去稀释液，重新配置

4  吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底 吸头尽可能一次性使用

5  不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间） 常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求。

6  偶联***（strept***idin-HRP）浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度

7  ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板

8  没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

9  样本溶血严重 建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。