ELISA***盒的成分

1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T

2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1

3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1

5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1

6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1

7 终止液: 1N*** 12mL x 1

8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但***盒没有提供) (450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性***管(用于浓缩酶标记和显色剂)

ELISA***盒的试验原理

***盒是固相夹心法酶联吸附实验（ELISA）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的***同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

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Elisa***盒操作注意事项

1．Elisa***盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请***后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按污染物处理。

9．本***不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

不正常的标准曲线

1  错误的方法重悬标准品  加入正确量的溶液重悬标准品，重悬充分

2  标准品稀释错误  按照说明书要求稀释标准品

3  标准品污染  使用一次性的灭菌吸头， 标准品贮存于2-8 ℃

4  错误的倍比稀释步骤  按照说明书倍比稀释标准品

5  波长选择错误 TMB为底物和以OPD为底物的***盒均有使用，而 前者比色波长为450nm，后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。

6  标准品混用  不同批号***勿混用

7  ***盒在运输途中时间太长，温度太高，标准品失活  尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温

8  ELISA未终止而直接检测450nm和620nm TMB显色需终止后检测，否则会出现620nm比450nm读数高的现象。（数值仍有梯度规律）