ELISA***盒的应用技术

ELISA检测***盒应用定性夹心检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，这些就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa***盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

ELISA***盒——ELISA实验通用规则

1、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

Elisa***盒实验原理

将目标包被于微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生***的目标，将未结合的生物素洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的***。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。