亲和柱原理介绍
亲和层析(IAC)可称为色谱技术,是一种利用抗原特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将抗、惰性微珠共价结合,然后装入小柱,将被测溶液流过亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,然后用洗脱缓冲液洗脱抗原(被测物),从而得到纯化的抗原(被测物),收集的抗原样品液可直接用于 HPLC 分析或处理后用荧光光度计检测。
亲和柱的应用
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◆ 食品、饲料中***的测定:见相关的***标准(如GB 5009系列的***测定标准方法)、其他行业标准、地方标准等。
◆ ***中***的测定:如《中国药典》2020版 通则2351 ***测定法,品种正文中***、玉米赤霉烯酮检查项。
◆ 食品中农残、营养成分等其他检测项目。
亲和柱——亲和层析的分离原理
生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性,如抗原与***,酶与底物或***,与受体等,这种结合往往是专一的而且是可逆的,生物分子间的这种结合力称为亲和力,亲和层析的分离原理简单地说就是通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性的基质(也称载体)上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分离纯化。被固定在基质上的分子称为配体,配体与基质共价结合,构成亲和层析的固定相,称为亲和吸附剂,蛋白质的生物特异性可以帮助选择特异性的配体,一般是目的蛋白质与配体结合而不吸附杂质。蛋白质吸附后再利用洗脱液的快速变换和加入竞争剂的方法进行洗脱。
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