ELISA***盒的测定原理

测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应，所以任何的诊断剂离不开好的原料，如抗原，酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原，而则为纯化抗原动物后获得的多和使用杂交瘤技术得到的，而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用***工程方法制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定***几成为现实的新一代***，各种新型使用的测定方法也不断出现。

ELISA***盒——会出现的问题及解决办法

1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶标记物。

解决办法：请按照操作步骤进行。

b.原因：***盒内容物未能充分回。

解决办法：确定***盒内容物回温后再进行操作。

c.原因：室温太低。

解决办法：若室温太低(<19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。

d.原因：未使用***盒的清洗液清洗。

解决办法： 请用***盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因：***盒已过有效期限。

解决办法：请更换成仍在有效期限内的***盒。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

显色淡，灵敏度偏低

1  ***盒未充分平衡 ***盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有***已平衡至室温（约25℃）

2  样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）

3  酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥

4  包被遭到*** 操作温和，移液枪不能碰到孔底

5  样本和孵育条件不合适 按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。

6  洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；

7  偶联HRP***污染 弃去***，重新配置

8  错误的稀释偶联HRP*** 弃去***，重新配置

9  TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色；S4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65

10  样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。

11  滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。

12  酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板，建议使用ELISA高吸附力板子。