Elisa试剂盒的优点
1.特异性强:不与其它细胞反应。
2.重复性好:板内、板间变异系数均小于10%。
3.稳定性高:实验效果很稳定。
4.超灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品,稀释度和样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
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Elisa试剂盒的安全性
8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
2. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
3. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
4. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
5. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
显色淡,灵敏度偏低
1 试剂盒未充分平衡 试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)
3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥
4 包被遭到破坏 操作温和,移液枪不能碰到孔底
5 样本和孵育条件不合适 按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。
6 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间;
7 偶联HRP试剂污染 弃去试剂,重新配置
8 错误的稀释偶联HRP试剂 弃去试剂,重新配置
9 TMB底物孵育时间过短,因非人为因素影响,需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间:人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色;S4-5有淡蓝色;机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
10 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数,确认样本稀释倍数。
11 滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12 酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板,建议使用ELISA高吸附力板子。
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