ELISA试剂盒的制备方法

包括以下步骤：

1)抗原表位的计算机筛选；

2)抗原的制备；

3)采集；

4)间接ELISA方法的建立；

5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证；

6)试剂盒的稳定性验证；

7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出戊型病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊病毒的流行和阻断戊病毒由猪向人传播。

Elisa试剂盒技术原理

(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶标记。

(2). 结合在固相载体表面a的抗原或仍保持其活性。

(3). 酶标记的抗原或既保留其活性，又保留酶的活性。

(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或起反应。再加入酶标记的抗原或，也通过反应而结合在固相载体上。

(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以反应为基础，将抗原、的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案

重复性不佳，高CV值 

1  样品不均一 加样前充分混匀样品，取样确保移液位置一致；

2  包被板表面遭到破坏 洗板加样时尽量小心，避免破坏板的包被表面

3  孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作，避免孔与孔的污染；封板膜不能重复使用

4  加样量不一致 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

5  边缘效应（外周孔显色较中心孔深） 孵育时尽量100 rpm旋转混匀

6  微量加样不准确 保证微量加样的准确性和均一性

7  不正确的洗涤 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，确定每一步的洗涤