ELISA***盒的操作方法——间接法

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1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

6.然后用DDW洗涤。

其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。

ELISA***盒的试验原理

***盒是固相夹心法酶联吸附实验（ELISA）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的***同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

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Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

重复性不佳，高CV值 

1  样品不均一 加样前充分混匀样品，取样确保移液位置一致；

2  包被板表面遭到*** 洗板加样时尽量小心，避免***板的包被表面

3  孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作，避免孔与孔的污染；封板膜不能重复使用

4  加样量不一致 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

5  边缘效应（外周孔显色较中心孔深） 孵育时尽量100 rpm旋转混匀

6  微量加样不准确 保证微量加样的准确性和均一性

7  不正确的洗涤 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，确定每一步的洗涤